【摘 要】
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目的利用柳氮磺吡啶(Sulfalsalazine,SAS)诱导氧化应激,探讨卵巢癌非耐药细胞与耐药细胞死亡方式的差异。方法选用人卵巢癌顺铂敏感细胞SKOV3和顺铂耐药细胞SKOV3/DDP,实验分
【机 构】
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吉林大学临床医学院,北华大学基础医学院病理学教研室,吉林大学基础医学院病理生理学系
【基金项目】
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国家自然科学基金课题(81541148);吉林省科技厅课题(20180623018TC);吉林省卫生技术创新项目(2017J084)
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目的利用柳氮磺吡啶(Sulfalsalazine,SAS)诱导氧化应激,探讨卵巢癌非耐药细胞与耐药细胞死亡方式的差异。方法选用人卵巢癌顺铂敏感细胞SKOV3和顺铂耐药细胞SKOV3/DDP,实验分组为对照组(Con),SAS各剂量组。应用铁死亡抑制剂Fer-1,实验分组为对照组,SAS组,Fer-1组,Fer-1与SAS联合作用组。应用程序性坏死抑制剂Nec-1,实验分组为对照组,SAS组,Nec-1组,Nec-1与SAS联合作用组。MTT法检测细胞生存率,实时无标记细胞功能分析法(Real time cell analysis,RTCA)实时连续分析细胞生存率。结果在SAS诱导卵巢癌细胞死亡过程中,耐药与非耐药卵巢癌细胞对SAS的敏感性不同,与非耐药细胞比较,耐药细胞对SAS更耐受。应用铁死亡抑制剂Fer-1,MTT、RTCA法结果显示,与SAS组比较,SAS与Fer-1联合作用组,SKOV3细胞生存率没有变化(P>0.05);Fer-1与SAS联合作用仅在24h前,SKOV3/DDP细胞生存率增加(P<0.05),其生存率曲线高于SAS组。应用程序性坏死(necroptosis)抑制剂Nec-1,RTCA结果显示,Nec-1与SAS联合作用持续至36hSKOV3细胞生存率曲线低于SAS作用组的生存率曲线(P>0.05);而Nec-1与SAS联合作用SKOV3/DDP细胞生存率曲线高于SAS作用组的生存率曲线(P<0.05)。Western blotting结果显示与SAS作用0h比较,SAS作用不同时间点,SKOV3细胞磷酸化MLKL蛋白表达没有变化(P>0.05),而SKOV3/DDP细胞中SAS作用12h、24h时磷酸化MLKL蛋白表达增强(P<0.05)。结论两种细胞对SAS的敏感性不同,可能与敏感细胞和耐药细胞在SAS作用时发生的细胞死亡途径差异有关。耐药细胞在氧化应激持续不同时间时发生程序性坏死和铁死亡途径。
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