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【摘要】 目的：分析丙型肝炎病毒（HCV）感染与抗核抗体（ANA）谱阳性率的关系。方法：选取2014年1月-2015年12月本院诊断的130例HCV患者作为HCV组，另择40例排除自身免疫性疾病和肝炎病毒感染的健康人群作为对照组，比较两组患者的ANA抗体阳性率和ANA抗体分布情况。结果：HCV组的ANA总阳性率为48.46%，明显高于对照组的12.50%，比较差异有统计学意义（P<0.05），其中HCV组1种ANA抗体阳性49例、2种11例、≥3种3例。结论：HCV感染患者的ANA抗体阳性表达率显著升高。
【关键词】 丙型病毒肝炎； 抗核抗体； 阳性率
Study on the Relationship between HCV Infection and the Positive Rate of ANA Spectrum/FAN Hong-mei，DONG Li-yan，SUN Shi-min.//Medical Innovation of China，2016，13（22）：115-117
【Abstract】 Objective：To analyze the relationship between the severity of hepatitis C virus（HCV） infection and the positive rate of anti nuclear antibody （ANA） spectrum.Method：From January 2014 to December 2015，130 cases of HCV infection were selected as the HCV group，40 healthy people who ruled out autoimmune disease and hepatitis virus infection were selected as the control group，the positive rate of ANA antibody and the distribution of ANA antibody in two groups were compared.Result：The total positive rate of ANA in HCV group was 48.46%，which was significantly higher than 12.50% of control group，the differences was statistically significant（P<0.05）.In HCV group，1 ANA antibody positive in 49 cases，2 kinds of ANA antibody positive in 11 cases，more than 3 kinds of ANA antibody positive in 3 cases.Conclusion：The positive expression rate of ANA antibody spectrum is significantly increased in HCV infected patients.
【Key words】 Hepatitis C virus； Antinuclear antibodies； Positive rate
First-author’s address： Shenzhen Shajing Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University，Shenzhen 518104，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.22.033
丙型肝炎由丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）感染所致，主要由血液或体液传播，据世界卫生组织估计，全球有1.7亿人感染HCV。我国健康人群抗HCV阳性率为0.7%～3.1%，约3800万人[1]。由于病毒生物学特点和宿主免疫功能等多方面因素，机体免疫往往难以有效清除病毒，致使50%～80%的HCV感染者发展为慢性肝炎，其中20%～30%将发展成肝硬化[2]。一般认为HCV导致的丙型肝炎是一组自身免疫性疾病，通过检测血清中抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）、抗平滑肌抗体（SMA）、抗双链DNA抗体（dsDNA）、抗线粒体抗体（AMA）等，可以为早期诊断HCV提供帮助[3]。然而对于抗核抗体谱在HCV中的差异性表达研究较少，本研究探讨了HCV感染与ANA谱阳性表达率的关系，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取2014年1月-2015年12月本院诊断的130例HCV患者作为HCV组，其中男79例，女51例；年龄18～65岁，平均（44.1±15.8）岁；急性HCV肝炎16例，慢性HCV肝炎85例，肝硬化29例；HCV RNA阳性（≥1.0×103 copies/mL）患者78例，HCV RNA阴性（<1.0×103 copies/mL）患者52例。另择同期40例排除自身免性疾病和肝炎病毒感染的健康人群作为对照组，其中男23例，女17例；年龄23～52岁，平均（42.3±9.5）岁。两组年龄和性别构成比较差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2 仪器与药品 丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒购自abcum公司，丙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒购自南京凯基生物科技有限公司，抗核抗体谱检测试剂盒购自江苏罗氏检测公司，超速离心机购自美国beckman公司，ABI7300荧光定量PCR购自美国ABI公司。
1.3 方法 采用ELISA法检测血清中ANA抗体谱的表达：采集患者或者对照组正常人群肘部静脉血，经1500 rpm离心5 min后得到血清，4 ℃保存待测。以标准品稀释液将标准品复溶，静置15 min后混匀，倍比稀释为7个浓度，取出板条，除了对照孔外加入不同浓度的标准品，剂量为100 μL/孔，采用封板盖封住，室温反应120 min。使用PBS液体洗涤3次，除了空白对照孔，每孔加入检测液（100 μL），室温孵育1 h，PBS洗涤3次，加入底物（50 μL/孔），避光孵育25 min，加入终止液5 min后测定450 nm处吸光度。 1.4 统计学处理 使用SAS 9.3软件对所得数据进行统计学分析，计量资料以（x±s）表示，比较采用t检验，计数资料以率（%）表示，比较采用 字2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
两组ANA抗体阳性率比较 HCV组的ANA阳性率为48.46%，明显高于健康组的12.50%，比较差异有统计学意义（P<0.05），见表1。17种ANA抗体具体分布情况见表2。
3 讨论
丙型肝炎病毒（Hepatitis C rirus，HCV）感染导致的疾病进展的病因机制尚不清楚，但一般认为与自身免疫性抗原表位在HCV感染后的暴露有关，同时CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞在抗原提呈中的异常活化可能是促进丙肝患者肝脏纤维化和肝细胞炎症性损伤的重要因素[4-5]。随着HCV RNA在丙肝患者血清中的异常表达发现，自身免疫系统紊乱在丙型肝炎患者中的作用越来越受到关注。HCV RNA整合进入患者肝细胞内后，主要通过对肝细胞周边间质细胞的免疫病理损伤和病毒复制导致宿主免疫反应发挥协同作用，而与HCV感染对肝细胞膜的直径损伤无关。细胞有丝分裂、凋亡或者被吞噬的肝细胞在病理性免疫损伤中细胞核分解、染色体断裂，导致部分带有遗传单位的抗原暴露，抗核抗体（ANA）抗体可明显增高[6]。大规模的基础人群和HCV病毒感染的流行病学分析可见，ANA、ENA抗体及类风湿因子抗体（rheumatoid factor，RF）为HCV感染患者体内主要存在的抗体谱，其中ANA抗体表达的阳性率最高，可达35.7%～43.8%。本次研究主要通过ANA在HCV患者中表达分析，可以为HCV的诊治和预后评估提供依据[7-8]。
ANA是反映自身免疫性紊乱的重要内源性抗体谱，主要包括SSA/Ro52kD抗体、SSB/La抗体、PCNA抗体、抗ds-DNA抗体等。本次研究发现，HCV组患者血清中的ANA表达阳性率较对照组增加了35.96%，增加幅度较为明显，提示HCV感染可以促进体内ANA的表达，引起免疫紊乱的发生；另一方面，增高的ANA可以进一步促进HCV RNA与肝细胞遗传单位的整合，进而促进肝细胞的损伤和间质成分的代偿性增生。合并1种ANA谱阳性的丙型肝炎患者的阳性率为37.69%，这与文献[9-10]报道的阳性率较为相似，同时随着合并ANA阳性种类的增加，HCV感染患者的阳性率不足3%。通过PCR计数检测不同的ANA抗体谱的表达，发现SSA/Ro52kD抗体、SSB/La抗体、PCNA抗体、抗ds-DNA抗体等仍然为HCV感染患者的主要抗核抗体。虽然AMA-m2、抗组蛋白、SSA/Ro60kD抗体等抗体同样存在一定数量的表达，但阳性率较低，SSA/Ro60kD抗体等在HCV发病中的作用仍不清晰。相关研究者通过对慢性HCV感染导致的肝纤维化患者的临床分析发现，ANA中SSA/Ro52kd和PCNA抗体表达阳性率最高，可达15%以上，同时SSA/Ro52k可以通过介导组织浸润细胞CD3+、细胞毒T细胞（TC）等特异攻击HCV感染的靶细胞，可引起肝细胞损伤[11-12]。临床上可以对于主要表达的几种抗体如SSA/Ro52kD抗体、SSB/La抗体、PCNA抗体等进行联合检测，从而为疾病的早期诊断及治疗转归的评估提供一定的参考，但仍然需要后研究扩大样本量进一步探讨。然而本次研究中并未探讨ANA与肝脏纤维化指标如Ⅲ型前胶原、透明质酸酶的关系，ANA对于肝脏纤维化病情的评估价值缺乏足够的说服力。
参考文献
[1]王岚，李东民，葛琳，等.2009-2012年中国艾滋病哨点监测人群丙型肝炎病毒感染状况分析[J].中华流行病学杂志，2013，34（6）：543-547.
[2] Afdhal N，Zeuzem S，Kwo P，et al.Ledipasvir and sofosbuvir for untreated HCV genotype 1 infection[J].N Engl J Med，2014，370（20）：1889-1898.
[3]杨清梅，黄志伟，贾伟建，等.丙肝病毒核心抗原与丙肝抗体联合检测在丙型肝炎诊断中的应用[J].实用医学杂志，2015，23（9）：1470-1471.
[4] Curry M P，Forns X，Chung R T，et al.Pretransplant sofosbuvir and ribavirin to prevent recurrence of HCV infection after liver transplantation[J].Hepatology，2013，58（S1）：313A-317A.
[5] Hamed M E，Kamal A N，Sherief L M，et al.Study of non-organ-specific antibodies in children with genotype 4 chronic hepatitis C[J].Saudi J Gastroenterol，2013，19（6）：262-270.
[6]陈桂成，颜沛云，吴青松，等.170848例患者丙型肝炎病毒抗体检测结果分析[J].中华医院感染学杂志，2013，24（13）：3190-3192.
[7]刘佳，樊盼英，薛秀娟，等.河南省2012-2014年新报告HIV感染者中HCV抗体流行状况分析[J].中华流行病学杂志，2015，36（11）：1269-1273.
[8] Mauss S，Berger F，Schober A，et al.Screening for autoantibodies in chronic hepatitis C patients has no effect on treatment initiation or outcome[J].J Viral Hepat，2013，20（4）：72-77.
[9] Yang D H，Ho L J，Lai J H.Useful biomarkers for assessment of hepatitis C virus infection-associated autoimmune disorders[J].World J Gastroenterol，2014，20（11）：2962-2970.
[10] Naga M，Amin M，Algendy D，et al.Low-density lipoprotein receptor genetic polymorphism in chronic hepatitis C virus Egyptian patients affects treatment response[J].World J Gastroenterol，2015，21（39）：11 141-11 151.
[11] Gupta V，Kumar A，Sharma P，et al.Most patients of hepatitis C virus infection in India present late for interferon-based antiviral treatment：an epidemiological study of 777 patients from a north Indian tertiary care center[J].J Clin Exp Hepatol，2015，5（2）：134-141.
[12] Basile U，Gulli F，Torti E，et al.Anti-nuclear antibody detection in cryoprecipitates：distinctive patterns in hepatitis C virus-infected patients[J].Dig Liver Dis，2015，47（1）：50-56.
（收稿日期：2016-04-27） （本文编辑：李颖）
【关键词】 丙型病毒肝炎； 抗核抗体； 阳性率
Study on the Relationship between HCV Infection and the Positive Rate of ANA Spectrum/FAN Hong-mei，DONG Li-yan，SUN Shi-min.//Medical Innovation of China，2016，13（22）：115-117
【Abstract】 Objective：To analyze the relationship between the severity of hepatitis C virus（HCV） infection and the positive rate of anti nuclear antibody （ANA） spectrum.Method：From January 2014 to December 2015，130 cases of HCV infection were selected as the HCV group，40 healthy people who ruled out autoimmune disease and hepatitis virus infection were selected as the control group，the positive rate of ANA antibody and the distribution of ANA antibody in two groups were compared.Result：The total positive rate of ANA in HCV group was 48.46%，which was significantly higher than 12.50% of control group，the differences was statistically significant（P<0.05）.In HCV group，1 ANA antibody positive in 49 cases，2 kinds of ANA antibody positive in 11 cases，more than 3 kinds of ANA antibody positive in 3 cases.Conclusion：The positive expression rate of ANA antibody spectrum is significantly increased in HCV infected patients.
【Key words】 Hepatitis C virus； Antinuclear antibodies； Positive rate
First-author’s address： Shenzhen Shajing Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University，Shenzhen 518104，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.22.033
丙型肝炎由丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）感染所致，主要由血液或体液传播，据世界卫生组织估计，全球有1.7亿人感染HCV。我国健康人群抗HCV阳性率为0.7%～3.1%，约3800万人[1]。由于病毒生物学特点和宿主免疫功能等多方面因素，机体免疫往往难以有效清除病毒，致使50%～80%的HCV感染者发展为慢性肝炎，其中20%～30%将发展成肝硬化[2]。一般认为HCV导致的丙型肝炎是一组自身免疫性疾病，通过检测血清中抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）、抗平滑肌抗体（SMA）、抗双链DNA抗体（dsDNA）、抗线粒体抗体（AMA）等，可以为早期诊断HCV提供帮助[3]。然而对于抗核抗体谱在HCV中的差异性表达研究较少，本研究探讨了HCV感染与ANA谱阳性表达率的关系，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取2014年1月-2015年12月本院诊断的130例HCV患者作为HCV组，其中男79例，女51例；年龄18～65岁，平均（44.1±15.8）岁；急性HCV肝炎16例，慢性HCV肝炎85例，肝硬化29例；HCV RNA阳性（≥1.0×103 copies/mL）患者78例，HCV RNA阴性（<1.0×103 copies/mL）患者52例。另择同期40例排除自身免性疾病和肝炎病毒感染的健康人群作为对照组，其中男23例，女17例；年龄23～52岁，平均（42.3±9.5）岁。两组年龄和性别构成比较差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2 仪器与药品 丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒购自abcum公司，丙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒购自南京凯基生物科技有限公司，抗核抗体谱检测试剂盒购自江苏罗氏检测公司，超速离心机购自美国beckman公司，ABI7300荧光定量PCR购自美国ABI公司。
1.3 方法 采用ELISA法检测血清中ANA抗体谱的表达：采集患者或者对照组正常人群肘部静脉血，经1500 rpm离心5 min后得到血清，4 ℃保存待测。以标准品稀释液将标准品复溶，静置15 min后混匀，倍比稀释为7个浓度，取出板条，除了对照孔外加入不同浓度的标准品，剂量为100 μL/孔，采用封板盖封住，室温反应120 min。使用PBS液体洗涤3次，除了空白对照孔，每孔加入检测液（100 μL），室温孵育1 h，PBS洗涤3次，加入底物（50 μL/孔），避光孵育25 min，加入终止液5 min后测定450 nm处吸光度。 1.4 统计学处理 使用SAS 9.3软件对所得数据进行统计学分析，计量资料以（x±s）表示，比较采用t检验，计数资料以率（%）表示，比较采用 字2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
两组ANA抗体阳性率比较 HCV组的ANA阳性率为48.46%，明显高于健康组的12.50%，比较差异有统计学意义（P<0.05），见表1。17种ANA抗体具体分布情况见表2。
3 讨论
丙型肝炎病毒（Hepatitis C rirus，HCV）感染导致的疾病进展的病因机制尚不清楚，但一般认为与自身免疫性抗原表位在HCV感染后的暴露有关，同时CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞在抗原提呈中的异常活化可能是促进丙肝患者肝脏纤维化和肝细胞炎症性损伤的重要因素[4-5]。随着HCV RNA在丙肝患者血清中的异常表达发现，自身免疫系统紊乱在丙型肝炎患者中的作用越来越受到关注。HCV RNA整合进入患者肝细胞内后，主要通过对肝细胞周边间质细胞的免疫病理损伤和病毒复制导致宿主免疫反应发挥协同作用，而与HCV感染对肝细胞膜的直径损伤无关。细胞有丝分裂、凋亡或者被吞噬的肝细胞在病理性免疫损伤中细胞核分解、染色体断裂，导致部分带有遗传单位的抗原暴露，抗核抗体（ANA）抗体可明显增高[6]。大规模的基础人群和HCV病毒感染的流行病学分析可见，ANA、ENA抗体及类风湿因子抗体（rheumatoid factor，RF）为HCV感染患者体内主要存在的抗体谱，其中ANA抗体表达的阳性率最高，可达35.7%～43.8%。本次研究主要通过ANA在HCV患者中表达分析，可以为HCV的诊治和预后评估提供依据[7-8]。
ANA是反映自身免疫性紊乱的重要内源性抗体谱，主要包括SSA/Ro52kD抗体、SSB/La抗体、PCNA抗体、抗ds-DNA抗体等。本次研究发现，HCV组患者血清中的ANA表达阳性率较对照组增加了35.96%，增加幅度较为明显，提示HCV感染可以促进体内ANA的表达，引起免疫紊乱的发生；另一方面，增高的ANA可以进一步促进HCV RNA与肝细胞遗传单位的整合，进而促进肝细胞的损伤和间质成分的代偿性增生。合并1种ANA谱阳性的丙型肝炎患者的阳性率为37.69%，这与文献[9-10]报道的阳性率较为相似，同时随着合并ANA阳性种类的增加，HCV感染患者的阳性率不足3%。通过PCR计数检测不同的ANA抗体谱的表达，发现SSA/Ro52kD抗体、SSB/La抗体、PCNA抗体、抗ds-DNA抗体等仍然为HCV感染患者的主要抗核抗体。虽然AMA-m2、抗组蛋白、SSA/Ro60kD抗体等抗体同样存在一定数量的表达，但阳性率较低，SSA/Ro60kD抗体等在HCV发病中的作用仍不清晰。相关研究者通过对慢性HCV感染导致的肝纤维化患者的临床分析发现，ANA中SSA/Ro52kd和PCNA抗体表达阳性率最高，可达15%以上，同时SSA/Ro52k可以通过介导组织浸润细胞CD3+、细胞毒T细胞（TC）等特异攻击HCV感染的靶细胞，可引起肝细胞损伤[11-12]。临床上可以对于主要表达的几种抗体如SSA/Ro52kD抗体、SSB/La抗体、PCNA抗体等进行联合检测，从而为疾病的早期诊断及治疗转归的评估提供一定的参考，但仍然需要后研究扩大样本量进一步探讨。然而本次研究中并未探讨ANA与肝脏纤维化指标如Ⅲ型前胶原、透明质酸酶的关系，ANA对于肝脏纤维化病情的评估价值缺乏足够的说服力。
参考文献
[1]王岚，李东民，葛琳，等.2009-2012年中国艾滋病哨点监测人群丙型肝炎病毒感染状况分析[J].中华流行病学杂志，2013，34（6）：543-547.
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[3]杨清梅，黄志伟，贾伟建，等.丙肝病毒核心抗原与丙肝抗体联合检测在丙型肝炎诊断中的应用[J].实用医学杂志，2015，23（9）：1470-1471.
[4] Curry M P，Forns X，Chung R T，et al.Pretransplant sofosbuvir and ribavirin to prevent recurrence of HCV infection after liver transplantation[J].Hepatology，2013，58（S1）：313A-317A.
[5] Hamed M E，Kamal A N，Sherief L M，et al.Study of non-organ-specific antibodies in children with genotype 4 chronic hepatitis C[J].Saudi J Gastroenterol，2013，19（6）：262-270.
[6]陈桂成，颜沛云，吴青松，等.170848例患者丙型肝炎病毒抗体检测结果分析[J].中华医院感染学杂志，2013，24（13）：3190-3192.
[7]刘佳，樊盼英，薛秀娟，等.河南省2012-2014年新报告HIV感染者中HCV抗体流行状况分析[J].中华流行病学杂志，2015，36（11）：1269-1273.
[8] Mauss S，Berger F，Schober A，et al.Screening for autoantibodies in chronic hepatitis C patients has no effect on treatment initiation or outcome[J].J Viral Hepat，2013，20（4）：72-77.
[9] Yang D H，Ho L J，Lai J H.Useful biomarkers for assessment of hepatitis C virus infection-associated autoimmune disorders[J].World J Gastroenterol，2014，20（11）：2962-2970.
[10] Naga M，Amin M，Algendy D，et al.Low-density lipoprotein receptor genetic polymorphism in chronic hepatitis C virus Egyptian patients affects treatment response[J].World J Gastroenterol，2015，21（39）：11 141-11 151.
[11] Gupta V，Kumar A，Sharma P，et al.Most patients of hepatitis C virus infection in India present late for interferon-based antiviral treatment：an epidemiological study of 777 patients from a north Indian tertiary care center[J].J Clin Exp Hepatol，2015，5（2）：134-141.
[12] Basile U，Gulli F，Torti E，et al.Anti-nuclear antibody detection in cryoprecipitates：distinctive patterns in hepatitis C virus-infected patients[J].Dig Liver Dis，2015，47（1）：50-56.
（收稿日期：2016-04-27） （本文编辑：李颖）