【摘 要】
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目的评价蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR)信号通路在乌司他丁减轻大鼠心肌细胞氧化应激损伤中的作用。方法H9c2心肌细胞以密度104个/孔接种于96孔板，采用随机数字表法分为5组：对照组(C组，n＝12)、H2O2组(n＝12)、H2O2＋乌司他丁组(HU组，n＝12)、H2O2＋乌司他丁＋LY294002组(HUL组，n＝9)和H2O2＋LY294002组(HL组，n＝9)。H
【机 构】
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310016 杭州市，浙江大学附属邵逸夫医院麻醉科,310016 杭州市，浙江大学附属邵逸夫医院麻醉科,310016 杭州市，浙江大学附属邵逸夫医院麻醉科,
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目的评价蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR)信号通路在乌司他丁减轻大鼠心肌细胞氧化应激损伤中的作用。
方法H9c2心肌细胞以密度104个/孔接种于96孔板，采用随机数字表法分为5组：对照组(C组，n＝12)、H2O2组(n＝12)、H2O2＋乌司他丁组(HU组，n＝12)、H2O2＋乌司他丁＋LY294002组(HUL组，n＝9)和H2O2＋LY294002组(HL组，n＝9)。H2O2组加入H2O2(终浓度200μmol/L)，在培养箱孵育12 h；HU组、HL组和HUL组分别加入乌司他丁(终浓度50 U/ml)、LY294002(终浓度10 μmol/L)、乌司他丁(终浓度50 U/ml)＋LY294002(终浓度10 μmol/L)孵育2 h，随后加入H2O2(终浓度200μmol/L)，在培养箱孵育12 h。采用MTT法检测细胞存活率；采用水溶性四氮唑-1比色法和硫代巴比妥酸比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平；采用流式细胞术检测细胞凋亡率；采用Western blot法测定细胞Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、mTOR、磷酸化mTOR(p-mTOR)、活化caspase-3和活化聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)的表达水平。计算p-Akt/AKT比值、p-mTOR/mTOR比值。
结果与C组比较，H2O2组细胞存活率降低，细胞凋亡率升高，SOD活性降低，MDA含量升高，活化caspase-3和活化PARP表达上调(P<0.05)，p-Akt/AKT比值、p-mTOR/mTOR比值差异无统计学意义(P>0.05)；与H2O2组比较，HU组细胞存活率升高，细胞凋亡率降低，SOD活性升高，MDA含量降低，p-Akt/AKT比值和p-mTOR/mTOR比值升高，活化caspase-3和活化PARP表达下调(P<0.05)；与HU组比较，HUL组细胞存活率降低，细胞凋亡率升高，活化caspase-3和活化PARP表达上调(P<0.05)。
结论乌司他丁减轻大鼠心肌细胞氧化应激损伤的机制与激活Akt/mTOR信号通路有关。
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