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目的
介绍经小鼠颌下腺导管(Wharton’s Duct)逆行插管技术并给予改进。
方法详细介绍该技术的操作过程,并在原有技术的基础上加以改进,并引入微量注射泵,显微外科器械等使得操作更加精细、精准,从而使得成功率更高。
结果前期训练每周3次,每次3~5只小鼠,起初插管成功率极低,出现插管位置不正确、插管部位出血、麻醉深度掌握不好导致小鼠死亡等情况。随着操作经验的积累,一个月后插管成功率迅速提高,后可达到100%。不同的注射药物对注射速度的要求不同,仅仅注射生理盐水,注射速度10 μl/min或25 μl/min,体积为25 μl或50 μl对小鼠颌下腺均无明显的损伤。应用纳米颗粒+小干扰RNA(siRNA,特定靶基因的siRNA)注射时,25 μl/min注射速度对组织的损伤较10 μl/min注射速度严重。25 μl/min对雌性小鼠造成的组织损伤更重。
结论经小鼠Wharton’s Duct逆行插管技术需要经过一定的训练才能掌握。熟悉解剖结构是关键,在解剖定位准确的前提下逐渐训练插管手法、力度以及插管角度,可不断提高操作成功率。