【摘 要】
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目的:考察mPEG-SC与重组猪尿酸氧化酶(recombinant porcine urate oxidase,rPUOX)摩尔比值,碳酸缓冲液pH值和浓度,以及酶浓度对rPUOX PEG化的影响.方法:用mPEG-SC对纯化rPUOX
【机 构】
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长江大学生命科学学院,荆州,434025;长江大学临床医学院,荆州,434025
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目的:考察mPEG-SC与重组猪尿酸氧化酶(recombinant porcine urate oxidase,rPUOX)摩尔比值,碳酸缓冲液pH值和浓度,以及酶浓度对rPUOX PEG化的影响.方法:用mPEG-SC对纯化rPUOX进行PEG化修饰.通过酶残余活力测定和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳对修饰效果进行评估.结果:随着mPEG-SC/rPUOX摩尔比值的提高,修饰程度也提高.在pH 10.1及其以下的碳酸缓冲液中rPUOX修饰不充分,pH 10.5修饰效果最好,pH 11.6效果下降.碳酸缓冲液为0.02 mol·L-1时,rPUOX溶解不完全,0.06和0.1mol·L-1的溶解和修饰均比较理想,0.1 mol·L-1溶液中rPUOX残余活力较高.摩尔比值相同的条件下,随着酶浓度的提高修饰效果也提高,5 mg·mL-1的酶浓度更加适合修饰反应.结论:优化的rPUOX PEG化的条件是:mPEG-SC/rPUOX摩尔比值为18.6倍;碳酸缓冲液的pH值为10.5,浓度为0.1 mol·L-1;酶质量浓度为5 mg·mL-1.
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