【摘 要】
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目的:制备抗人RKIP(hRKIP)的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定.方法:自行构建表达人RKIP重组蛋白(reRKIP), 纯化的reRKIP免疫BALB/c小鼠, 按常规方法进行细胞融合.采用有限稀释
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目的:制备抗人RKIP(hRKIP)的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定.方法:自行构建表达人RKIP重组蛋白(reRKIP), 纯化的reRKIP免疫BALB/c小鼠, 按常规方法进行细胞融合.采用有限稀释法和间接ELISA法克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株, 用免疫荧光和Western blot鉴定mAb的特异性.结果:成功构建RKIP原核表达载体, 转化BL21后可高效表达reRKIP, 成功地获得4株(EC1, ED2, ED5和8B3)分泌抗人reRKIP mAb的杂交瘤细胞株, 杂交瘤细胞培养上清分泌的mAb在免疫荧光和Western blot试验中均可与细胞中RKIP蛋白反应.结论:成功地制备了4株抗hRKIP mAb, 为进一步研究RKIP生物学功能奠定了基础.
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