【摘 要】
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目的用G rp78基因转染人肝细胞癌SMMC-7721,筛选阳性克隆并鉴定。方法利用真核表达载体pcDNA3.1+G rp78转染SMMC-7721,pcDNA3.1+G rp78与转染试剂的比例(μg/μL)分别为2∶3
【机 构】
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辽宁医学院附属第一医院病理科,辽宁医学院科学实验中心
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目的用G rp78基因转染人肝细胞癌SMMC-7721,筛选阳性克隆并鉴定。方法利用真核表达载体pcDNA3.1+G rp78转染SMMC-7721,pcDNA3.1+G rp78与转染试剂的比例(μg/μL)分别为2∶3、2∶4、2∶5、2∶6、2∶7、2∶8、2∶9,400μg/mL G418筛选阳性克隆后,传代扩增,W estern B lot鉴定克隆的G rp78表达情况。应用pcDNA3.1空载体作为阴性对照。结果W estern B lot显示,转染后的SMMC-7721经G418筛选,除一个克隆不高表达外,其余克隆均高表达G rp78。结论G rp78转染SMMC-7721的最佳转染效率是8∶2(转染试剂/DNA),由于假阳性克隆的存在,筛选后的克隆需要鉴定。
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