【摘 要】
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目的 构建微小RNA-133a重组慢病毒载体,观察其转染后对L6成肌细胞增殖、分化及转录因子MEF2A的影响.方法 构建表达含微小RNA-133a基因的重组慢病毒载体,转染L6成肌细胞,以实时定量PCR(Taqman探针法)对微小RNA-133a基因表达水平进行检测;细胞计数试剂盒(CCK-8)试验评价微小RNA-133a过表达后对L6成肌细胞增殖的影响;倒置荧光显微镜观察L6成肌细胞增殖、分化的
【机 构】
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030001太原,山西医科大学附属第二医院骨科,030001太原,山西医科大学附属第二医院骨科,030001太原,山西医科大学附属第二医院骨科,030001太原,山西医科大学附属第二医院骨科,2000
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目的 构建微小RNA-133a重组慢病毒载体,观察其转染后对L6成肌细胞增殖、分化及转录因子MEF2A的影响.方法 构建表达含微小RNA-133a基因的重组慢病毒载体,转染L6成肌细胞,以实时定量PCR(Taqman探针法)对微小RNA-133a基因表达水平进行检测;细胞计数试剂盒(CCK-8)试验评价微小RNA-133a过表达后对L6成肌细胞增殖的影响;倒置荧光显微镜观察L6成肌细胞增殖、分化的影响;Western blot法检测转录因子MEF2A表达水平的变化.结果 构建的微小RNA-133a重组慢病毒载体经质粒酶切和测序鉴定正确;与对照组比较,转染L6成肌细胞24h后,微小RNA-133a基因的相对表达量明显增加(P＜0.01);L6细胞增殖数量明显增加(P＜0.01),对L6成肌细胞的分化有明显抑制作用(P＜0.01);MEF2A的表达量逐渐下降(P＜0.01).结论 成功构建微小RNA-133a重组慢病毒载体并转染16成肌细胞后可高效表达微小RNA-133a,促进体外成肌细胞的增殖并抑制分化。
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