采用自制胆总管注射装置建立小鼠胆源性重症急性胰腺炎(SAP)模型,评价该装置对胆总管逆行注射法的改进特点及安全性。
方法将36只雄性ICR小鼠按随机数字表法分为胆源性SAP模型组和假手术(Sham)组,每组18只。以一次性胰岛素注射器(40 U)、200 μL塑料移液枪头、微量进样器(25 μL)为基本材料自制一种小鼠胆总管逆行注射装置〔国家实用新型专利(ZL 2014 2 0694365.4)〕,应用该装置向小鼠胆总管逆行注射3.5%牛磺胆酸钠(1 mL/kg)制备胆源性SAP模型;Sham组注射等量生理盐水。两组分别于术后6、24、48 h处死6只小鼠,取腹主动脉血,检测血清淀粉酶(AMY)、丙氨酸转氨酶(ALT)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、血肌酐(SCr)、氧合指数(PaO2/FiO2)、Ca2+水平等;取胰头组织行苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察胰腺组织病理学改变并进行损伤评分。
结果使用自制胆总管注射装置在直视条件下成功完成小鼠胆总管逆行穿刺及药物注射。术后6 h模型组血清AMY、ALT、SCr即较Sham组明显升高,24 h达峰值,48 h稍有下降,但仍显著高于同时期Sham组〔24 h AMY(U/L)为7 325±1 154比1 737±197,ALT(U/L)为176.0±5.0比38.3±2.0,SCr(μmol/L)为46.3±1.5比17.8±0.6,均P<0.01〕;模型组术后6 h CK-MB即较Sham组显著升高,48 h达峰值(U/L:6 h为749.8±42.2比383.3±35.5,48 h为3 340.1±203.6比704.6±63.5,均P<0.01);术后6 h PaO2/FiO2即较Sham组显著降低,随后开始升高,48 h恢复至Sham组水平〔mmHg(1 mmHg=0.133 kPa):6 h为327.5±33.8比424.8±31.0,P<0.01;48 h为429.8±41.8比464.7±43.3,P>0.05〕;术后血Ca2+水平持续降低,48 h显著低于Sham组(mmol/L:1.58±0.14比2.45±0.21,P<0.01)。Sham组小鼠术后胰腺以水肿为主,且随时间延长而逐渐改善;模型组小鼠术后6 h胰腺即有局灶性坏死表现,并继发性加重,至48 h胰腺小叶结构消失、炎性细胞广泛浸润。与Sham组比较,模型组各时间点胰腺组织病理学评分均显著升高,48 h达峰值(分:13.3±0.3比3.0±0.1,P<0.01)。
结论自制小鼠胆总管注射装置实现了直视下通过胆总管逆行注射法建立小鼠胆源性SAP模型,降低了手术难度,制模结果符合胆源性SAP临床病情特点。