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摘 要：本实验采用正交实验设计法，以高效液相色谱法测定从麦贞花颗粒中提出女贞苷的量为考察指标，考察提取次数、加水倍数、提取时间3个因素。含量测定方法：色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5μm）；流动相以甲醇-水（40：60）；检测波长为224nm；流速1.0mL·min-1；柱温：35℃。女贞苷对照品在50～350μg/ml范围内线性关系良好。女贞苷平均回收率分别为99.3%。女贞苷最佳提取工艺为加入8倍量水，煎煮提取90分钟，连续提取3次。本工艺稳定、可行、收率高；测定方法简便、准确，
关键词：麦贞花颗粒；提取；工艺
女贞子为麦贞花颗粒主要成分之一。女贞子，别名女贞实、冬青子、鼠梓子，为木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果实。女贞子是一味补肾滋阴、养肝明目的中药，可治肝肾不足、头晕耳呜、头发早白及两目昏糊等病症。女贞子具有补益肝肾，明目，清虚热的功效，主要用于头晕目眩、须发早白、视物昏花、阴虚发热等。女贞子含墩果酸、甘露醇、葡萄糖、棕榈酸、铜、锌、铁、锰等。《本草正》记载：“养阴气，平阴火，解烦热骨蒸，止虚汗，消渴，及淋浊，崩漏，便血，尿血，阴疮，痔漏疼痛。亦清肝火，可以明目止泪。”女贞子尚有强心、扩张冠状血管、保肝、免疫调节、抗动脉粥样硬化、抗炎、抗衰老、扩张外周血管、止咳、抗菌等作用[1-2]。本实验以女贞苷为指标对麦贞花颗粒提取工艺进行研究。
1 仪器与试药
WP-UP-Ⅲ-20精密型实验室专用超纯水机（四川沃特尔水处理设备有限公司）；FA1204CFAC型全自動內校電子分析天平（北京同德创业科技有限公司）；KQ250DE煎煮波清洗器煎煮波检测仪器（烟台鑫康商贸有限公司）；HH-601超级恒温水浴（北京富瑞恒创科技有限公司）；PHS-550智能型台式酸度计（杭州陆恒生物科技有限公司）；EX1600四元低压梯度液相色谱仪（南京皓而普分析设备有限公司）；可见分光光度计（扫描型）（石家庄伟天科学仪器设备有限公司）。女贞苷对照品（自制）。乙腈（北京亚太龙兴化工有限公司）；甲醇（北京亚太龙兴化工有限公司）；乙醇（北京亚太龙兴化工有限公司）。
2 方法与结果
2.1 单因素考察
2.1.1 提取次数
取麦贞花颗粒药材，至于圆底烧瓶内，分别提取四次，第一次加10倍水，煎煮提取60分钟，过滤，合并滤液，减压浓缩；第二次加10倍水，煎煮提取60分钟，连续提取两次，过滤，合并滤液，减压浓缩；第三次加10倍水，煎煮提取60分钟，连续提取三次，过滤，合并滤液，减压浓缩。第四次加10倍水，煎煮提取60分钟，连续提取四次，过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中女贞苷含量并计算女贞苷收率。
2.1.2 加水倍數
取麦贞花颗粒药材，至于圆底烧瓶内，分别提取四次，第一次加14倍水，煎煮提取60分钟，连续四次，第二次加12倍水，煎煮提取60分钟，连续四次，第三次加10倍水，煎煮提取60分钟，连续四次，第四次加8倍水，煎煮提取60分钟，连续四次，分别过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中女贞苷含量并计算女贞苷收率。
2.1.3 提取时间
取麦贞花颗粒药材，至于圆底烧瓶内，分别提取三次，第一次加10倍水，煎煮提取60分钟，连续四次，第二次加10倍水，煎煮提取90分钟，连续四次，第三次加10倍水，煎煮提取120分钟，连续四次，分别过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中女贞苷含量并计算女贞苷收率。
2.2 正交试验设计
实验结果表明，提取次数、加水倍数和提取时间对女贞苷收率影响较大。选择提取次数、加水倍数和提取时间作为考察因素，采用正交试验法对影响提取效率的其它工艺条件进行优选。采用3个考察水平，用L9（34）正交表进行试验，因素水平表见表1。
3 含量测定
3.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[3-5]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5μm）；流动相以甲醇-水（40：60）；检测波长为224nm；流速1.0mL·min-1；柱温：35℃。理论板数按女贞苷峰计算应不得低于2000。
3.2 供试品溶液的制备
取提取膏适量，精密量取，至于25毫升容量瓶内，用70%乙醇超声10分钟，放置室温，用70%乙醇定容，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
3.3 对照品溶液的制备
分别精密称取女贞苷对照品5mg，置50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
3.4 标准曲线的制备
将浓度为50μg/ml，100μg/ml，150μg/ml，200μg/ml，250μg/ml，300μg/ml，350μg/ml的对照品溶液分别吸取20μL注入HPLC，以进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值A为纵坐标，绘制标准曲线。试验表明，女贞苷对照品在50～350μg/ml范围内线性关系良好。
3.5 重现性试验
称取同一批的膏子6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.82%，结果表明此方法的重现性良好。
3.6 回收率试验
取已知含量的同一批供试品各6份，分别精密添加一定量的女贞苷对照品，测定含量，计算回收率。平均回收率为99.3%，RSD为0.73%。
4 实验结果
按照L9（34）正交设计表条件进行试验，得到最佳提取工艺为加入8倍量水，煎煮提取90分钟，连续提取3次。本工艺稳定、可行、收率高。
参考文献
[1]张明发，沈雅琴.女贞子抗炎、抗肿瘤和免疫调节作用的研究进展[J].现代药物与临床，2012（05）.
[2]范秦鹤，侯雅玲，朱爱华，吕兰熏，冯敬群.女贞子不同炮制品升高白细胞耐缺氧作用及毒性比较[J].西北药学杂志，2004（01）.
[3]李泽运，陈晓辉，马凤，苏丹，毕开顺.RP-HPLC法同时测定二至丸中红景天苷、女贞子苷和蟛蜞菊内酯的含量[J].药物分析杂志，2011（01）.
[4]李泽运，陈晓辉，马凤，苏丹，毕开顺.RP-HPLC法同时测定二至丸中红景天苷、女贞子苷和蟛蜞菊内酯的含量[J].药物分析杂志，2011（01）.
[5]黄雯，苏子仁，毕文川，李军，施丽琼，文英强，詹华强.HPLC法测定女贞子药材中女贞苷的含量[J].药物分析杂志，2009（05）.
关键词：麦贞花颗粒；提取；工艺
女贞子为麦贞花颗粒主要成分之一。女贞子，别名女贞实、冬青子、鼠梓子，为木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果实。女贞子是一味补肾滋阴、养肝明目的中药，可治肝肾不足、头晕耳呜、头发早白及两目昏糊等病症。女贞子具有补益肝肾，明目，清虚热的功效，主要用于头晕目眩、须发早白、视物昏花、阴虚发热等。女贞子含墩果酸、甘露醇、葡萄糖、棕榈酸、铜、锌、铁、锰等。《本草正》记载：“养阴气，平阴火，解烦热骨蒸，止虚汗，消渴，及淋浊，崩漏，便血，尿血，阴疮，痔漏疼痛。亦清肝火，可以明目止泪。”女贞子尚有强心、扩张冠状血管、保肝、免疫调节、抗动脉粥样硬化、抗炎、抗衰老、扩张外周血管、止咳、抗菌等作用[1-2]。本实验以女贞苷为指标对麦贞花颗粒提取工艺进行研究。
1 仪器与试药
WP-UP-Ⅲ-20精密型实验室专用超纯水机（四川沃特尔水处理设备有限公司）；FA1204CFAC型全自動內校電子分析天平（北京同德创业科技有限公司）；KQ250DE煎煮波清洗器煎煮波检测仪器（烟台鑫康商贸有限公司）；HH-601超级恒温水浴（北京富瑞恒创科技有限公司）；PHS-550智能型台式酸度计（杭州陆恒生物科技有限公司）；EX1600四元低压梯度液相色谱仪（南京皓而普分析设备有限公司）；可见分光光度计（扫描型）（石家庄伟天科学仪器设备有限公司）。女贞苷对照品（自制）。乙腈（北京亚太龙兴化工有限公司）；甲醇（北京亚太龙兴化工有限公司）；乙醇（北京亚太龙兴化工有限公司）。
2 方法与结果
2.1 单因素考察
2.1.1 提取次数
取麦贞花颗粒药材，至于圆底烧瓶内，分别提取四次，第一次加10倍水，煎煮提取60分钟，过滤，合并滤液，减压浓缩；第二次加10倍水，煎煮提取60分钟，连续提取两次，过滤，合并滤液，减压浓缩；第三次加10倍水，煎煮提取60分钟，连续提取三次，过滤，合并滤液，减压浓缩。第四次加10倍水，煎煮提取60分钟，连续提取四次，过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中女贞苷含量并计算女贞苷收率。
2.1.2 加水倍數
取麦贞花颗粒药材，至于圆底烧瓶内，分别提取四次，第一次加14倍水，煎煮提取60分钟，连续四次，第二次加12倍水，煎煮提取60分钟，连续四次，第三次加10倍水，煎煮提取60分钟，连续四次，第四次加8倍水，煎煮提取60分钟，连续四次，分别过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中女贞苷含量并计算女贞苷收率。
2.1.3 提取时间
取麦贞花颗粒药材，至于圆底烧瓶内，分别提取三次，第一次加10倍水，煎煮提取60分钟，连续四次，第二次加10倍水，煎煮提取90分钟，连续四次，第三次加10倍水，煎煮提取120分钟，连续四次，分别过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中女贞苷含量并计算女贞苷收率。
2.2 正交试验设计
实验结果表明，提取次数、加水倍数和提取时间对女贞苷收率影响较大。选择提取次数、加水倍数和提取时间作为考察因素，采用正交试验法对影响提取效率的其它工艺条件进行优选。采用3个考察水平，用L9（34）正交表进行试验，因素水平表见表1。
3 含量测定
3.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[3-5]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5μm）；流动相以甲醇-水（40：60）；检测波长为224nm；流速1.0mL·min-1；柱温：35℃。理论板数按女贞苷峰计算应不得低于2000。
3.2 供试品溶液的制备
取提取膏适量，精密量取，至于25毫升容量瓶内，用70%乙醇超声10分钟，放置室温，用70%乙醇定容，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
3.3 对照品溶液的制备
分别精密称取女贞苷对照品5mg，置50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
3.4 标准曲线的制备
将浓度为50μg/ml，100μg/ml，150μg/ml，200μg/ml，250μg/ml，300μg/ml，350μg/ml的对照品溶液分别吸取20μL注入HPLC，以进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值A为纵坐标，绘制标准曲线。试验表明，女贞苷对照品在50～350μg/ml范围内线性关系良好。
3.5 重现性试验
称取同一批的膏子6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.82%，结果表明此方法的重现性良好。
3.6 回收率试验
取已知含量的同一批供试品各6份，分别精密添加一定量的女贞苷对照品，测定含量，计算回收率。平均回收率为99.3%，RSD为0.73%。
4 实验结果
按照L9（34）正交设计表条件进行试验，得到最佳提取工艺为加入8倍量水，煎煮提取90分钟，连续提取3次。本工艺稳定、可行、收率高。
参考文献
[1]张明发，沈雅琴.女贞子抗炎、抗肿瘤和免疫调节作用的研究进展[J].现代药物与临床，2012（05）.
[2]范秦鹤，侯雅玲，朱爱华，吕兰熏，冯敬群.女贞子不同炮制品升高白细胞耐缺氧作用及毒性比较[J].西北药学杂志，2004（01）.
[3]李泽运，陈晓辉，马凤，苏丹，毕开顺.RP-HPLC法同时测定二至丸中红景天苷、女贞子苷和蟛蜞菊内酯的含量[J].药物分析杂志，2011（01）.
[4]李泽运，陈晓辉，马凤，苏丹，毕开顺.RP-HPLC法同时测定二至丸中红景天苷、女贞子苷和蟛蜞菊内酯的含量[J].药物分析杂志，2011（01）.
[5]黄雯，苏子仁，毕文川，李军，施丽琼，文英强，詹华强.HPLC法测定女贞子药材中女贞苷的含量[J].药物分析杂志，2009（05）.