【摘 要】
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目的 本研究目的为构建重组穿梭载体,拯救带有增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)重组病毒,为重组二联苗的研制奠定基础.方法 选择已经证实的US区
【机 构】
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牡丹江师范学院生命科学与技术学院,牡丹江157011中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,哈尔滨150069;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,哈尔滨,15
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目的 本研究目的为构建重组穿梭载体,拯救带有增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)重组病毒,为重组二联苗的研制奠定基础.方法 选择已经证实的US区域的US2-SORF3、US7-US8和UL区域中的UL15-UL18的非编码区作为插入位点构建穿梭载体P-US2-SORF3-EGFP,P-UL15-UL18-EGFP,P-US7-US8-EGFP.在已感染疫苗毒的鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblasts,CEFs)中转染穿梭载体,经细胞同源重组,收集细胞上清,进行噬斑筛选及纯化.结果 成功构建了三个带有EGFP标签的穿梭载体,pBlusecript Ⅱ SK构建的穿梭载体未成功筛选到重组噬斑而用pUC18构建的穿梭载体成功筛选到重组噬斑.结论 拯救鸭瘟重组毒的研究中,pBlusecript Ⅱ SK载体可能不是最佳的适用载体,也可能是插入位点为病毒复制的必须区.
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