质粒介导shRNA对心肌细胞kir2.1蛋白表达和搏动频率的影响

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目的 构建抑制大鼠心肌细胞kir2.1基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,sbRNA)真核表达质粒(pEGFP6-1kir2.1),观察RNAi对大鼠心室肌细胞kir2.1 mRNA和蛋白表达情况和搏动频率的影响。方法 选择5个针对大鼠心肌细胞kir2.1基因的RNA干扰位点,分别设计合成5对相应的寡核苷酸链,形成双链后依次将其连入带有U6启动子的载体,得到含5个目的基因的重组质粒pEGFP6—1kir2.1,转染大鼠心肌细胞,转染后72h RT-PCR和Western-b1ot检测k
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