目的 探讨细胞外热休克蛋白90α(HSP90d)参与肝癌细胞转移的可能分子机制.方法 采用免疫印迹法检测HSP90 α在低、高转移性肝癌MHCC97-L和MHCC97-H细胞外的表达.选取高转移潜能MHCC97-H细胞,应用不穿透细胞膜的小分子抑制剂抑制细胞外HSP90α表达,体外侵袭实验观察细胞侵袭、迁移能力的变化,明胶酶谱法分析基质金属蛋白酶2(MMP-2)活性的改变.免疫印迹和免疫共沉淀法检测细胞外辅助分子伴侣HSP70和MMP-2的表达及其与HSP90α的相互作用.利用RNA干扰技术下调细胞HSP70表达,观察细胞外HSP90 α与MMP-2相互作用及其细胞转移潜能的变化.结果 HSP90α在不同转移潜能肝癌细胞内外均表达,且与肝癌细胞转移潜能呈正相关.MHCC97-H细胞经特异性HSP90抑制剂二甲氨基乙氨基-17-去甲氧基格尔德霉素-N-氧化物(DMAG-N-oxide)作用24 h后,穿过上室基底膜的细胞数较未处理组和空白对照组明显下降(P＜0.01),分别为(28.11±3.56)、(80.12±4.16)、(82.24±4.12)个.体外侵袭实验显示,穿过Matrigel人工基底膜的细胞数低于未处理组和空白对照组,分别为(36.54±4.12)、(95.12±3.48)、(101.11±3.36)个,差异有统计学意义(P=0.017),并伴有细胞外MMP-2活性减低.HSP70和MMP-2均可在MHCC97-H细胞外表达,且能与HSP90α相互结合.小分子干扰RNA (siRNA)能有效抑制细胞HSP70表达,MHCC97-H细胞外HSP90α和MMP-2相互作用减弱,MMP-2活性下降,细胞侵袭、迁移能力受抑制.同时联合应用MMP-2抑制剂,具有协同抑制效应.结论 细胞外HSP90α可能通过与HSP70形成伴侣复合体介导MMP-2成熟活化,增强肝癌细胞侵袭、迁移运动,提示其可能是潜在的对肝癌转移实施防治的靶点。
热休克蛋白90α在人类肝癌细胞外的表达及其对侵袭、迁移能力的影响
【摘 要】
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目的 探讨细胞外热休克蛋白90α(HSP90d)参与肝癌细胞转移的可能分子机制.方法 采用免疫印迹法检测HSP90 α在低、高转移性肝癌MHCC97-L和MHCC97-H细胞外的表达.选取高转移潜能MHCC97-H细胞,应用不穿透细胞膜的小分子抑制剂抑制细胞外HSP90α表达,体外侵袭实验观察细胞侵袭、迁移能力的变化,明胶酶谱法分析基质金属蛋白酶2(MMP-2)活性的改变.免疫印迹和免疫共沉淀法检
【机 构】
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510102广州医学院第一附属医院感染科,510102广州医学院第一附属医院感染科,510102广州医学院第一附属医院感染科,510102广州医学院第一附属医院感染科,510102广州医学院第一附属医
【出 处】
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肿瘤研究与临床
【发表日期】
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2014年26期
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