【摘 要】
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目的制备携带人野生型鞘氨醇激酶基因(SPKwt)及其突变体(SPKDN)的腺病毒载体,为研究SPK的生物学功能提供高效基因转移载体.方法将野生型和突变体SPK基因亚克隆至穿梭载体pshu
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目的制备携带人野生型鞘氨醇激酶基因(SPKwt)及其突变体(SPKDN)的腺病毒载体,为研究SPK的生物学功能提供高效基因转移载体.方法将野生型和突变体SPK基因亚克隆至穿梭载体pshuttle-cmv,重组的穿梭质粒经Pme Ⅰ线性化后,电转化E. coli BJ-AD-1感受态,获得带有目的基因的腺病毒重组子质粒;重组子经Pac Ⅰ线性化后,以脂质体介导转染293包装细胞,获得重组腺病毒载体;分别行PCR鉴定重组腺病毒是否携带目的基因,Western blot鉴定目的基因是否表达,酶活性检测判断野生型
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