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摘要 [目的]建立测定不同产地短柄五加根、茎中刺五加苷E含量的HPLC方法。[方法]采用Agilent TC-C 18（2） （250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱;以乙腈-0.1%磷酸（16∶84）为流动相;流速1 mL/min;检测波长220 nm，进样体积为10 μL，柱温30 ℃。[结果]刺五加苷E在8.0～160.6 μg/mL与峰面积呈良好的线性关系（ r =0.999 6），平均加样回收率为98.62%，RSD为0.50%。[结论]该方法操作简便、稳定可靠，适用于短柄五加根、茎中刺五加苷E含量的测定，可作为倒卵叶五加药材的质量控制指标。
关键词 短柄五加;倒卵叶五加;刺五加苷E;HPLC;含量测定
中图分类号 R 284 文献标识码 A
文章编号 0517-6611（2021）19-0180-03
doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.19.047
开放科学（资源服务）标识码（OSID）：
Determination of Eleutheroside E Content in Roots and Stems of Acanthopanax brachypus Harms by HPLC
CUI Lei1，2，SHU Quan-yong1，2，ZHAO Xin-li1，2 et al
（1.Shaanxi Institute of Traditional Chinese Medicine （Shaanxi Medical Information Center），Xianyang，Shaanxi 712000;2.Shaanxi Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine and Natural Medicine Research and Development， Xi’an，Shaanxi 710075）
Abstract [Objective] To establish an HPLC method for the simultaneous determination of eleutheroside E content in the roots and stems of Acanthopanax brachypus from different habitats.[Method] Separation was carried out on Agilent TC-C 18（2） column （250 mm×4.6 mm，5 μ m）.The mobile phase consisted of acetonitrile -0.1% phosphoric acid water （16∶84） with a flow rate of 1.0 mL/min.The detection wavelengths was 220 nm， volume of injection was 10 μL， and the temperature of column was set at 30 °C.[Result]Eleutheroside E showed a good linear relationship between 8.0-160.6 μg/mL and the peak area （ r =0.999 6）， the average recovery rate was 98.62%， and the RSD was 0.50%.[Conclusion]The method is convenient， stable and reliable， which is suitable for the determination of the content of eleutheroside E in the roots and stems of Acanthopanax brachypus Harms， and can be used as the quality control index of Acanthopanacis brachypus radix et rhizoma seu caulis.
Key words Acanthopanax brachypus Harms; Acanthopanacis brachypus radix et rhizoma seu caulis; Eleutheroside E; HPLC; Content determination
基金項目 陕西省科技统筹创新工程项目（2016KTTSSF 01-01-02）;咸阳市重大科技专项计划（2014K01-17）。
作者简介 崔蕾（1989—），女，甘肃天水人，药师，硕士，从事中药资源开发与质量控制研究。
收稿日期 2021-05-10
倒卵叶五加 （Acanthopanacis brachypus radix et rhizoma seu caulis）为五加科植物短柄五加 Acanthopanax brachypus Harms [Eleutherococcus brachypus （Harms） Nakai]的干燥根和根茎或茎，分布于我国西北地区的陕西、甘肃、宁夏，主治体虚乏力、腰膝酸软、脾肾阳虚、失眠多梦、食欲不振等病症[1-2]。倒卵叶五加是陕西的特色植物药，有很高的药用及研究价值[3]。现代药理学研究表明，倒卵叶五加具有增强免疫力、抗疲劳、保护缺血心肌、抑制血小板聚集、抗血栓形成和抗氧化等药理作用[4-10]。目前，对倒卵叶五加的研究主要集中在苷类和黄酮类化合物方面，对其具体化学成分的研究以及质量控制的文献比较少。倒卵叶五加药材的质量控制指标单一，主要以紫丁香苷的含量测定为标准[11-12]。近年来，采用HPLC法对刺五加、糙叶五加中刺五加苷E含量的测定均有研究报道[13-15]，而倒卵叶五加中刺五加苷E的含量测定鲜见报道。通过该试验的前期研究发现，短柄五加根、茎中刺五加苷E的含量高于紫丁香苷。为了进一步有效控制倒卵叶五加的质量，该研究选择以刺五加苷E为检测指标，试图建立稳定、高效的倒卵叶五加药材中刺五加苷E的测定方法，并比较不同产地、不同部位的短柄五加中刺五加苷E含量的高低，以期为其资源的开发利用与药材质量控制提供科学依据。 1 材料与方法
1.1 仪器 UltiMate 3000高效液相色谱仪（赛默飞世尔科技有限公司）;METTLER AG-135电子分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）;KQ-300 VDE型双频数控超声波清洗器（江苏昆山超声仪器有限公司）。
1.2 试剂 刺五加苷E对照品（中国食品药品检定所，批号111713-201804）;乙腈为色谱纯（美国霍尼韦尔公司）;甲醇、磷酸为分析纯（成都市科隆化学品有限公司）;水为娃哈哈纯净水。
1.3 试材 该研究所用倒卵叶五加药材分别采集于甘肃正宁县、陕西宜君县、陕西黄龙县、陕西旬邑县4个产地，经陕西中药研究所赵新礼主任药师鉴定为短柄五加 （Acanthopanax brachypus Harms）的干燥根、茎。
1.4 试验方法
1.4.1 色谱条件。采用Agilent TC-C 18 （2）色谱柱 （250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈- 0.1%磷酸（16∶84）为流动相，流速1 mL/min，检测波长220 nm，柱温30 ℃，进样量10 μL。
1.4.2 对照品溶液的制备及标准曲线的绘制 取刺五加苷E对照品适量，精密称定，加入50%甲醇溶解定容，摇匀，制成含802.78 μg/mL的对照品溶液。精密吸取对照品溶液0.05、0.10、0.20、0.50、1.00 mL，分别置于5 mL容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，分别吸取10 μL注入液相色谱仪中，在“1.4.1”色谱条件下测定峰面积。以进样浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，计算线性回归方程。
1.4.3 供试品溶液的制备。精密称取干燥的短柄五加样品粗粉2.0 g，置50 mL具塞锥形瓶中，加入50%甲醇溶液20 mL，称定质量，超声提取30 min（功率300 W，频率45 kHz），放置室温，再称定质量，用50%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过取续滤液，以0.45 μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。
2 结果与分析
2.1 对照品与样品的高效液相色谱图 从图1可以看出，在“1.4.1”色谱条件下，对照品及供试品溶液中刺五加苷E的保留时间均为16.1 min，刺五加苷E的色谱峰达到了比较理想的分离效果，样品所测主峰旁边无明显杂峰，经计算样品与其相邻峰的分离度大于1.5，说明此条件适合该样品测定刺五加苷E。
2.2 线性关系考察 以进样浓度为横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归，得刺五加苷E的回归方程为 Y=0.297 6X+0.187 9（r=0.999 6）。 结果表明，刺五加苷E浓度在8.0～160.6 μg/mL与峰面积呈良好的线性关系。
2.3 精密度试验 吸取刺五加苷E对照品储备液，重复进样6次，每次进样10 μL，测定对照品的峰面积分别为24.204 3、24.043 5、24.125 7、24.211 4、24.058 2、23.847 5，计算得刺五加苷E峰面积的RSD为0.56% （n =6） ，表明仪器精密度良好。
2.4 重复性试验 取同一短柄五加茎粗粉2.0 g，共6份，精密称定，按照“1.4.3”方法制备供试品溶液，在“1.4.1”色谱条件下进行测定，计算得样品中刺五加苷E的平均含量为0.812 8 mg/g，RSD为0.44%（ n =6），表明该方法重复性良好。
2.5 稳定性试验 取同一短柄五加茎粗粉2.0 g，精密称定，按照“1.4.3”方法制备供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10、12 h进样10 μL，测定峰面积并计算RSD。结果发现，在0、2、4、6、8、10、12 h进样测得同一样品中刺五加苷E峰面积分别为22.889 2、22.924 5、23.261 3、23.285 6、22.983 7、23.321 2、23.105 7，其RSD为0.79%，试验结果表明供试溶液在室温下12 h内稳定。
2.6 加样回收率試验 取同一短柄五加茎粗粉1.0 g，精密称定，共6份，分别置于25 mL具塞锥形瓶中，精密加入802.78 μg/mL刺五加苷E的标准溶液1 mL，按“1.4.3”方法制备供试品溶液，在“1.4.1”色谱条件下进行测定。计算得刺五加苷E的平均回收率为98.62%，RSD为0.50%，结果见表1。
2.7 样品含量测定 精密称取8批不同采收时间及产地的短柄五加根、茎样品各3份，按“1.4.3”方法制备供试品，按照“1.4.1”色谱条件进样3次，测定峰面积，由线性回归方程计算样品中刺五加苷E的含量，结果见表2。从表2可以看出，4个产地短柄五加茎中的刺五加苷E含量均高于根;产地不同、采收时间不同，刺五加苷E含量也存在一定的差异;茎中刺五加苷E的含量以2018年采收自陕西黄龙县产地最高，甘肃正宁县产地次之;而根中刺五加苷E的含量以2018年采收自陕西黄龙县产区的最高，其中陕西旬邑县产地药材根中刺五加苷E的含量显著低于其他产区。同一产地的短柄五加茎中目标成分含量显著高于根中，差异达到1～2倍，差异最大的是陕西旬邑县，其茎中刺五加苷E含量是根中的2.7倍。
3 讨论
3.1 供试品溶液制备方法的选择 该研究分别考察了超声提取和回流提取对短柄五加根、茎中刺五加苷E提取效率的影响，发现这2种提取方法效果相差不大。考虑到回流提取法操作繁琐、耗时长， 而超声提取法快速简便， 故该试验采用超声提取法。提取溶剂考察了甲醇和乙醇，结果表明以甲醇超声提取优于乙醇提取，同时又比较了甲醇、50%甲醇、75%甲醇提取效果和超声不同时间（30、40 min）的效果，最终结果显示以50%甲醇提取30 min的效果最佳。
3.2 测定波长的选择 分别吸取刺五加苷 E 对照品溶液、短柄五加根、茎粗粉制备的供试品溶液，注入UltiMate 3000 高效液相色谱仪，200～400 nm 波长扫描。根据扫描结果，确定刺五加苷 E 的最大吸收波长为 220 nm。 3.3 流动相的选择 在流动相的选择中， 比较了不同比例的乙腈- 0.1%磷酸水溶液，还进行了梯度混合条件的摸索， 最终确定为乙腈-0.1%磷酸水溶液（16∶84）。在此条件下样品中刺五加苷E的色谱峰峰形对称，且与周围色谱峰分离度较好。
3.4 含量测定指标的选择 短柄五加根、茎中含有丰富的挥发油和油脂、黄酮及其苷类、蒽醌及其苷类、香豆素、酚类或鞣质、氨基酸、甾体及三萜皂苷、有机酸及多糖等成分，所含的成分类型与同属其他植物基本相同，药理研究表明短柄五加和刺五加在主治及功能方面有很多相似之处，短柄五加茎在加大剂量使用时，可以替代刺五加使用[16]。人们已从刺五加中分离出胡萝卜苷（刺五加苷A）、紫丁香苷（刺五加苷B）、紫丁香树脂酚二糖苷（刺五加苷D和刺五加苷E） 等8种刺五加苷，其中刺五加苷E的生物活性最强[17]。短柄五加含有多种皂苷、多糖、黄酮等药理成分活性成分。其中，刺五加苷E具有人参皂苷的相似生理活性，能增加机体非特异性抵抗力，具显著的缓解压力作用[18]，即“适应原样”的作用[19]。该研究原计划建立同时测定刺五加苷B和刺五加苷E这2种成分的方法，但预试验结果表明，短柄五加中刺五加苷E的量较高，刺五加苷B的量普遍较低，故该研究选择刺五加苷E作为倒卵叶五加药材质量标准中含量测定的指标。
4 结论
目前，倒卵叶五加药材一直未列入陕西省地方标准和国家药典，限制了其进一步开发和应用，致使倒卵叶五加产业的发展较慢。市面上倒卵叶五加药材品质参差不齐，急需建立倒卵叶五加药材的质量控制标准。该研究首次对倒卵叶五加药材中刺五加苷E进行含量测定，结果发现，4个产地短柄五加茎中的刺五加苷E含量均高于根;产地不同、采收时间不同，刺五加苷E含量也存在一定的差异;茎中刺五加苷E的含量以2018年采收自陕西黄龙县产地最高，甘肃正宁县产地次之;而根中刺五加苷E的含量以2018年采收自陕西黄龙县产区的最高，其中陕西旬邑县产地药材根中刺五加苷E的含量显著低于其他产区。 该研究建立的HPLC测定方法简便快速、分离度好、结果稳定可靠，可以为倒卵叶五加药材质量控制提供科学依据。
参考文献
[1]
中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志：第54卷[M].北京：科学出版社，1978：103.
[2] 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草：第15卷 第5册[M].上海：上海科学技术出版社，1999：754.
[3] 邢泽田.陕西省倒卵叶五加[J].自然资源研究，1984（4）：29-34.
[4] 杨智锋，李改琴，郭五保，等.倒卵叶五加的生药学研究[J].西北药学杂志，2004，19（5）：205-207.
[5] 张艺芳，朱爱华.倒卵叶五加茎的一般药理研究[J].陕西中医，2013，34（7）：922-923.
[6] 马世玉，吴基良，向继洲，等.倒卵叶五加总皂甙对大鼠心肌顿抑的作用[J].中国心血管杂志，2002，7（5）：307-310.
[7] 何丽娅，王秋贵，吴基良，等.倒卵叶五加总皂甙对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响[J].中药药理与临床，1996，12（6）：29-30.
[8] 朱爱华，张艺芳，杨钧.倒卵叶五加对免疫功能的影响[J].西北药学杂志，2013，28（4）：383-385.
[9] 杨钧，朱爱华，张艺芳，等.倒卵叶五加对胃肠功能的实验研究[J].陕西中医，2013， 34（9）：1245-1247.
[10] 馬世玉，吴基良，陈金和，等.倒卵叶五加总皂甙的抗氧化作用[J].咸宁医学院学报， 2002，16（4）：229-232.
[11] 曹爱兰，张俏，史文静，等.HPLC测定倒卵叶五加冲剂中紫丁香苷含量研究[J].亚太传统医药，2013，9（5）：33-34.
[12] 刘军峰，高锦成，刘建峰，等.HPLC测定倒卵叶五加中紫丁香苷含量[J].西北药学杂志，2008，23（6）：358-359.
[13] 冯胜，刘向前，张伟兰，等.RP-HPLC法测定糙叶五加不同部位中刺五加苷B和E[J].中草药，2011，42（6）：1144-1146.
[14] 尚海花，王淼，刘颖，等.HPLC法测定不同产地刺五加中原儿茶酸、紫丁香苷、绿原酸、刺五加苷E和异嗪皮啶[J].现代药物与临床，2018，33（6）：1324-1328.
[15] 王一涵，金英今，徐博，等.刺五加化学成分研究[J].中国药学杂志，2014，49（19）：1701-1703.
[16] 简毓峰，胡浩斌.短柄五加的化学成分与药理活性研究进展[J].中药材，2011，34（8）：1302-1306.
[17] 杨晓丹，井月娥，卢芳.刺五加的化学成分研究进展[J].中华中医药学刊，2015，33（2）：316-318.
[18] 钟世红，卫莹芳， 古锐.HPLC法测定红毛五加中刺五加苷E [J].中草药，2009，40（6）：979-981.
[19] 刘起华，朱礼，李文兰.刺五加主要活性成分化学与药理研究[J].时珍国医国药，1999，10（4）：305-306.
关键词 短柄五加;倒卵叶五加;刺五加苷E;HPLC;含量测定
中图分类号 R 284 文献标识码 A
文章编号 0517-6611（2021）19-0180-03
doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.19.047
开放科学（资源服务）标识码（OSID）：
Determination of Eleutheroside E Content in Roots and Stems of Acanthopanax brachypus Harms by HPLC
CUI Lei1，2，SHU Quan-yong1，2，ZHAO Xin-li1，2 et al
（1.Shaanxi Institute of Traditional Chinese Medicine （Shaanxi Medical Information Center），Xianyang，Shaanxi 712000;2.Shaanxi Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine and Natural Medicine Research and Development， Xi’an，Shaanxi 710075）
Abstract [Objective] To establish an HPLC method for the simultaneous determination of eleutheroside E content in the roots and stems of Acanthopanax brachypus from different habitats.[Method] Separation was carried out on Agilent TC-C 18（2） column （250 mm×4.6 mm，5 μ m）.The mobile phase consisted of acetonitrile -0.1% phosphoric acid water （16∶84） with a flow rate of 1.0 mL/min.The detection wavelengths was 220 nm， volume of injection was 10 μL， and the temperature of column was set at 30 °C.[Result]Eleutheroside E showed a good linear relationship between 8.0-160.6 μg/mL and the peak area （ r =0.999 6）， the average recovery rate was 98.62%， and the RSD was 0.50%.[Conclusion]The method is convenient， stable and reliable， which is suitable for the determination of the content of eleutheroside E in the roots and stems of Acanthopanax brachypus Harms， and can be used as the quality control index of Acanthopanacis brachypus radix et rhizoma seu caulis.
Key words Acanthopanax brachypus Harms; Acanthopanacis brachypus radix et rhizoma seu caulis; Eleutheroside E; HPLC; Content determination
基金項目 陕西省科技统筹创新工程项目（2016KTTSSF 01-01-02）;咸阳市重大科技专项计划（2014K01-17）。
作者简介 崔蕾（1989—），女，甘肃天水人，药师，硕士，从事中药资源开发与质量控制研究。
收稿日期 2021-05-10
倒卵叶五加 （Acanthopanacis brachypus radix et rhizoma seu caulis）为五加科植物短柄五加 Acanthopanax brachypus Harms [Eleutherococcus brachypus （Harms） Nakai]的干燥根和根茎或茎，分布于我国西北地区的陕西、甘肃、宁夏，主治体虚乏力、腰膝酸软、脾肾阳虚、失眠多梦、食欲不振等病症[1-2]。倒卵叶五加是陕西的特色植物药，有很高的药用及研究价值[3]。现代药理学研究表明，倒卵叶五加具有增强免疫力、抗疲劳、保护缺血心肌、抑制血小板聚集、抗血栓形成和抗氧化等药理作用[4-10]。目前，对倒卵叶五加的研究主要集中在苷类和黄酮类化合物方面，对其具体化学成分的研究以及质量控制的文献比较少。倒卵叶五加药材的质量控制指标单一，主要以紫丁香苷的含量测定为标准[11-12]。近年来，采用HPLC法对刺五加、糙叶五加中刺五加苷E含量的测定均有研究报道[13-15]，而倒卵叶五加中刺五加苷E的含量测定鲜见报道。通过该试验的前期研究发现，短柄五加根、茎中刺五加苷E的含量高于紫丁香苷。为了进一步有效控制倒卵叶五加的质量，该研究选择以刺五加苷E为检测指标，试图建立稳定、高效的倒卵叶五加药材中刺五加苷E的测定方法，并比较不同产地、不同部位的短柄五加中刺五加苷E含量的高低，以期为其资源的开发利用与药材质量控制提供科学依据。 1 材料与方法
1.1 仪器 UltiMate 3000高效液相色谱仪（赛默飞世尔科技有限公司）;METTLER AG-135电子分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）;KQ-300 VDE型双频数控超声波清洗器（江苏昆山超声仪器有限公司）。
1.2 试剂 刺五加苷E对照品（中国食品药品检定所，批号111713-201804）;乙腈为色谱纯（美国霍尼韦尔公司）;甲醇、磷酸为分析纯（成都市科隆化学品有限公司）;水为娃哈哈纯净水。
1.3 试材 该研究所用倒卵叶五加药材分别采集于甘肃正宁县、陕西宜君县、陕西黄龙县、陕西旬邑县4个产地，经陕西中药研究所赵新礼主任药师鉴定为短柄五加 （Acanthopanax brachypus Harms）的干燥根、茎。
1.4 试验方法
1.4.1 色谱条件。采用Agilent TC-C 18 （2）色谱柱 （250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈- 0.1%磷酸（16∶84）为流动相，流速1 mL/min，检测波长220 nm，柱温30 ℃，进样量10 μL。
1.4.2 对照品溶液的制备及标准曲线的绘制 取刺五加苷E对照品适量，精密称定，加入50%甲醇溶解定容，摇匀，制成含802.78 μg/mL的对照品溶液。精密吸取对照品溶液0.05、0.10、0.20、0.50、1.00 mL，分别置于5 mL容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，分别吸取10 μL注入液相色谱仪中，在“1.4.1”色谱条件下测定峰面积。以进样浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，计算线性回归方程。
1.4.3 供试品溶液的制备。精密称取干燥的短柄五加样品粗粉2.0 g，置50 mL具塞锥形瓶中，加入50%甲醇溶液20 mL，称定质量，超声提取30 min（功率300 W，频率45 kHz），放置室温，再称定质量，用50%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过取续滤液，以0.45 μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。
2 结果与分析
2.1 对照品与样品的高效液相色谱图 从图1可以看出，在“1.4.1”色谱条件下，对照品及供试品溶液中刺五加苷E的保留时间均为16.1 min，刺五加苷E的色谱峰达到了比较理想的分离效果，样品所测主峰旁边无明显杂峰，经计算样品与其相邻峰的分离度大于1.5，说明此条件适合该样品测定刺五加苷E。
2.2 线性关系考察 以进样浓度为横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归，得刺五加苷E的回归方程为 Y=0.297 6X+0.187 9（r=0.999 6）。 结果表明，刺五加苷E浓度在8.0～160.6 μg/mL与峰面积呈良好的线性关系。
2.3 精密度试验 吸取刺五加苷E对照品储备液，重复进样6次，每次进样10 μL，测定对照品的峰面积分别为24.204 3、24.043 5、24.125 7、24.211 4、24.058 2、23.847 5，计算得刺五加苷E峰面积的RSD为0.56% （n =6） ，表明仪器精密度良好。
2.4 重复性试验 取同一短柄五加茎粗粉2.0 g，共6份，精密称定，按照“1.4.3”方法制备供试品溶液，在“1.4.1”色谱条件下进行测定，计算得样品中刺五加苷E的平均含量为0.812 8 mg/g，RSD为0.44%（ n =6），表明该方法重复性良好。
2.5 稳定性试验 取同一短柄五加茎粗粉2.0 g，精密称定，按照“1.4.3”方法制备供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10、12 h进样10 μL，测定峰面积并计算RSD。结果发现，在0、2、4、6、8、10、12 h进样测得同一样品中刺五加苷E峰面积分别为22.889 2、22.924 5、23.261 3、23.285 6、22.983 7、23.321 2、23.105 7，其RSD为0.79%，试验结果表明供试溶液在室温下12 h内稳定。
2.6 加样回收率試验 取同一短柄五加茎粗粉1.0 g，精密称定，共6份，分别置于25 mL具塞锥形瓶中，精密加入802.78 μg/mL刺五加苷E的标准溶液1 mL，按“1.4.3”方法制备供试品溶液，在“1.4.1”色谱条件下进行测定。计算得刺五加苷E的平均回收率为98.62%，RSD为0.50%，结果见表1。
2.7 样品含量测定 精密称取8批不同采收时间及产地的短柄五加根、茎样品各3份，按“1.4.3”方法制备供试品，按照“1.4.1”色谱条件进样3次，测定峰面积，由线性回归方程计算样品中刺五加苷E的含量，结果见表2。从表2可以看出，4个产地短柄五加茎中的刺五加苷E含量均高于根;产地不同、采收时间不同，刺五加苷E含量也存在一定的差异;茎中刺五加苷E的含量以2018年采收自陕西黄龙县产地最高，甘肃正宁县产地次之;而根中刺五加苷E的含量以2018年采收自陕西黄龙县产区的最高，其中陕西旬邑县产地药材根中刺五加苷E的含量显著低于其他产区。同一产地的短柄五加茎中目标成分含量显著高于根中，差异达到1～2倍，差异最大的是陕西旬邑县，其茎中刺五加苷E含量是根中的2.7倍。
3 讨论
3.1 供试品溶液制备方法的选择 该研究分别考察了超声提取和回流提取对短柄五加根、茎中刺五加苷E提取效率的影响，发现这2种提取方法效果相差不大。考虑到回流提取法操作繁琐、耗时长， 而超声提取法快速简便， 故该试验采用超声提取法。提取溶剂考察了甲醇和乙醇，结果表明以甲醇超声提取优于乙醇提取，同时又比较了甲醇、50%甲醇、75%甲醇提取效果和超声不同时间（30、40 min）的效果，最终结果显示以50%甲醇提取30 min的效果最佳。
3.2 测定波长的选择 分别吸取刺五加苷 E 对照品溶液、短柄五加根、茎粗粉制备的供试品溶液，注入UltiMate 3000 高效液相色谱仪，200～400 nm 波长扫描。根据扫描结果，确定刺五加苷 E 的最大吸收波长为 220 nm。 3.3 流动相的选择 在流动相的选择中， 比较了不同比例的乙腈- 0.1%磷酸水溶液，还进行了梯度混合条件的摸索， 最终确定为乙腈-0.1%磷酸水溶液（16∶84）。在此条件下样品中刺五加苷E的色谱峰峰形对称，且与周围色谱峰分离度较好。
3.4 含量测定指标的选择 短柄五加根、茎中含有丰富的挥发油和油脂、黄酮及其苷类、蒽醌及其苷类、香豆素、酚类或鞣质、氨基酸、甾体及三萜皂苷、有机酸及多糖等成分，所含的成分类型与同属其他植物基本相同，药理研究表明短柄五加和刺五加在主治及功能方面有很多相似之处，短柄五加茎在加大剂量使用时，可以替代刺五加使用[16]。人们已从刺五加中分离出胡萝卜苷（刺五加苷A）、紫丁香苷（刺五加苷B）、紫丁香树脂酚二糖苷（刺五加苷D和刺五加苷E） 等8种刺五加苷，其中刺五加苷E的生物活性最强[17]。短柄五加含有多种皂苷、多糖、黄酮等药理成分活性成分。其中，刺五加苷E具有人参皂苷的相似生理活性，能增加机体非特异性抵抗力，具显著的缓解压力作用[18]，即“适应原样”的作用[19]。该研究原计划建立同时测定刺五加苷B和刺五加苷E这2种成分的方法，但预试验结果表明，短柄五加中刺五加苷E的量较高，刺五加苷B的量普遍较低，故该研究选择刺五加苷E作为倒卵叶五加药材质量标准中含量测定的指标。
4 结论
目前，倒卵叶五加药材一直未列入陕西省地方标准和国家药典，限制了其进一步开发和应用，致使倒卵叶五加产业的发展较慢。市面上倒卵叶五加药材品质参差不齐，急需建立倒卵叶五加药材的质量控制标准。该研究首次对倒卵叶五加药材中刺五加苷E进行含量测定，结果发现，4个产地短柄五加茎中的刺五加苷E含量均高于根;产地不同、采收时间不同，刺五加苷E含量也存在一定的差异;茎中刺五加苷E的含量以2018年采收自陕西黄龙县产地最高，甘肃正宁县产地次之;而根中刺五加苷E的含量以2018年采收自陕西黄龙县产区的最高，其中陕西旬邑县产地药材根中刺五加苷E的含量显著低于其他产区。 该研究建立的HPLC测定方法简便快速、分离度好、结果稳定可靠，可以为倒卵叶五加药材质量控制提供科学依据。
参考文献
[1]
中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志：第54卷[M].北京：科学出版社，1978：103.
[2] 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草：第15卷 第5册[M].上海：上海科学技术出版社，1999：754.
[3] 邢泽田.陕西省倒卵叶五加[J].自然资源研究，1984（4）：29-34.
[4] 杨智锋，李改琴，郭五保，等.倒卵叶五加的生药学研究[J].西北药学杂志，2004，19（5）：205-207.
[5] 张艺芳，朱爱华.倒卵叶五加茎的一般药理研究[J].陕西中医，2013，34（7）：922-923.
[6] 马世玉，吴基良，向继洲，等.倒卵叶五加总皂甙对大鼠心肌顿抑的作用[J].中国心血管杂志，2002，7（5）：307-310.
[7] 何丽娅，王秋贵，吴基良，等.倒卵叶五加总皂甙对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响[J].中药药理与临床，1996，12（6）：29-30.
[8] 朱爱华，张艺芳，杨钧.倒卵叶五加对免疫功能的影响[J].西北药学杂志，2013，28（4）：383-385.
[9] 杨钧，朱爱华，张艺芳，等.倒卵叶五加对胃肠功能的实验研究[J].陕西中医，2013， 34（9）：1245-1247.
[10] 馬世玉，吴基良，陈金和，等.倒卵叶五加总皂甙的抗氧化作用[J].咸宁医学院学报， 2002，16（4）：229-232.
[11] 曹爱兰，张俏，史文静，等.HPLC测定倒卵叶五加冲剂中紫丁香苷含量研究[J].亚太传统医药，2013，9（5）：33-34.
[12] 刘军峰，高锦成，刘建峰，等.HPLC测定倒卵叶五加中紫丁香苷含量[J].西北药学杂志，2008，23（6）：358-359.
[13] 冯胜，刘向前，张伟兰，等.RP-HPLC法测定糙叶五加不同部位中刺五加苷B和E[J].中草药，2011，42（6）：1144-1146.
[14] 尚海花，王淼，刘颖，等.HPLC法测定不同产地刺五加中原儿茶酸、紫丁香苷、绿原酸、刺五加苷E和异嗪皮啶[J].现代药物与临床，2018，33（6）：1324-1328.
[15] 王一涵，金英今，徐博，等.刺五加化学成分研究[J].中国药学杂志，2014，49（19）：1701-1703.
[16] 简毓峰，胡浩斌.短柄五加的化学成分与药理活性研究进展[J].中药材，2011，34（8）：1302-1306.
[17] 杨晓丹，井月娥，卢芳.刺五加的化学成分研究进展[J].中华中医药学刊，2015，33（2）：316-318.
[18] 钟世红，卫莹芳， 古锐.HPLC法测定红毛五加中刺五加苷E [J].中草药，2009，40（6）：979-981.
[19] 刘起华，朱礼，李文兰.刺五加主要活性成分化学与药理研究[J].时珍国医国药，1999，10（4）：305-306.