【摘 要】
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以兜兰为试材,用改进的CTAB法提取总DNA,采用正交试验设计,分析Mg2＋浓度、dNTP浓度、引物浓度和Taq DNA聚合酶用量对ISSR-PCR扩增的影响,并通过梯度PCR确定最佳退火温度,最终
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以兜兰为试材,用改进的CTAB法提取总DNA,采用正交试验设计,分析Mg2＋浓度、dNTP浓度、引物浓度和Taq DNA聚合酶用量对ISSR-PCR扩增的影响,并通过梯度PCR确定最佳退火温度,最终建立兜兰ISSR扩增反应体系。最佳反应体系为：25μL体系中,含10×PCR buffer 2.5μL、1.5mmol/L Mg2＋、0.15mmol/L dNTP、0.6μmol/L引物、1.0 UTaq酶和40 ng模板DNA。反应程序为：94℃5 min,94℃30 s,56.2℃45 s,72
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