【摘 要】
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目的:探讨microRNA-25(miR-25)对缺氧/复氧诱导的H9C2细胞纤维化的作用及机制.方法:建立miR-25过表达/沉默的H9C2细胞株,行缺氧/复氧损伤处理,Real-time PCR检测miR-25的表达
【机 构】
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贵州省人民医院心内科,贵阳,550002
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目的:探讨microRNA-25(miR-25)对缺氧/复氧诱导的H9C2细胞纤维化的作用及机制.方法:建立miR-25过表达/沉默的H9C2细胞株,行缺氧/复氧损伤处理,Real-time PCR检测miR-25的表达,Western blot检测TIMP2、MMP2、CollagenⅠ、CollagenⅢ、Fibronectin及HMGB1蛋白表达水平.构建转染HMGB1 shRNA的H9C2稳定细胞系,行缺氧/复氧损伤处理,Western blot检测HMGB1、TIMP2、MMP2、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达水平.双荧光素酶试验验证miR-25与HMGB1的靶向关系.结果:miR-25高表达组,HMGB1表达减少,TIMP2、MMP2、CollagenⅠ、CollagenⅢ、Fibronectin蛋白表达减少,细胞纤维化程度降低,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.01).转染HMGB1-shRNA组H9C2细胞,缺氧/复氧处理后,HMGB1、TIMP2、MMP2、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达减少,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.01).双荧光素报告基因显示,转染miR-25mimic+野生型HMGB1-3′UTR报告基因载体组荧光素酶信号强度明显下降;对照组荧光素酶没有变化,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:miR-25通过靶向调控HMGB1表达降低缺氧/复氧诱导的H9C2细胞纤维化.
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