【摘 要】
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目的:改进和优化正常SD新生大鼠结肠黏膜上皮细胞原代培养的方法。方法:采用Ⅰ、Ⅳ型胶原酶和透明质酸酶消化加密度差异沉淀离心法分离SD新生大鼠结肠隐窝单位和肠上皮细胞,
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属协和医院普通外科
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目的:改进和优化正常SD新生大鼠结肠黏膜上皮细胞原代培养的方法。方法:采用Ⅰ、Ⅳ型胶原酶和透明质酸酶消化加密度差异沉淀离心法分离SD新生大鼠结肠隐窝单位和肠上皮细胞,用含10%胎牛血清及EGF等因子的DMEM原代培养并维持,免疫组化方法检测细胞角蛋白并鉴定。结果:成功分离出增殖活性良好的结肠隐窝单位、结肠上皮细胞团块以及单个结肠上皮细胞。体外培养表明,结肠隐窝单位增殖旺盛,7~9 d即可形成细胞单层,2周左右达到高潮,以后逐渐开始出现凋亡坏死,3周以后细胞大量崩解并消亡。结论:SD新生大鼠结肠上皮细胞原代培养方法为结肠相关疾病的研究提供了稳定可靠的正常上皮细胞模型。
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