【摘 要】
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目的:研究pcDU6载体质粒介导的转化生长因子β(TGF-β1)短发夹RNA(pcDU6-A1-A2和pcDU6-B1-B2)对人血清白蛋白(HAS)致人肾小管上皮细胞(HK2细胞)增殖,TGF-β1、结缔组织生长因
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目的:研究pcDU6载体质粒介导的转化生长因子β(TGF-β1)短发夹RNA(pcDU6-A1-A2和pcDU6-B1-B2)对人血清白蛋白(HAS)致人肾小管上皮细胞(HK2细胞)增殖,TGF-β1、结缔组织生长因子(CTGF)和纤连蛋白(FN)表达的影响,并探讨HAS刺激HK2细胞增殖及CTGF和FN基因过表达是否通过TGF-β1介导.方法:构建TGF-β1短发夹RNA的pcDU6载体质粒,体外培养HK2细胞株.采用脂质体转染将表达TGF-β1 shRNA的pcDU6质粒载体(pcDU6-A1-A2和pcDU6-B1-B2)分别导入试验组细胞.使用HAS(5 g/L)刺激HK2细胞12 h或24 h.用四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞增殖水平;逆转录多聚酶链反应半定量分析HK2细胞中TGF-β1,CTGF和FN mRNA的表达水平;双抗夹心酶联免疫吸附法检测HK2细胞培养液中TGF-β1及FN蛋白质水平.结果:HAS对HK2细胞增殖在5 g/L作用24 h最明显;HK2细胞在HAS刺激下可明显上调TGF-β1,CTGF及FN mRNA的表达,培养液中TGF-β1和FN的蛋白质含量亦明显升高 (P＜0.05).与pcDU6空载体组比较,pcDU6载体质粒介导的TGF-β1 shRNA干扰组TGF-β1, CTGF及FN mRNA的表达明显下调(P＜0.05).TGF-β1 shRNA转染HK2细胞后12 h或24 h,细胞培养液中TGF-β1和FN蛋白质含量明显下降,HK2细胞增殖被部分抑制(P＜0.05).TGF-β1shRNA干扰组组间比较以及pcDU6空载体转染组与HAS刺激组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:pcDU6载体质粒介导的TGF-β1shRNA能够明显抑制HAS刺激下HK2细胞增殖以及TGF-β1,CTGF和FN基因的表达,HAS刺激HK2细胞增殖及CTGF和FN基因的过表达可能通过TGF-β1介导.
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