【摘 要】
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为了建立一个重现性好、稳定性高,适用于海带属ISSR遗传分析的PCR反应体系,从海带属配子体材料中提取基因组DNA作为模板,应用正交设计试验对反应体系中各因子的不同浓度进行
【机 构】
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山东东方海洋科技股份有限公司/国家海藻工程技术研究中心/山东省海藻遗传育种与栽培技术重点实验室
【基金项目】
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国家科技支撑计划“海藻栽培新种质苗种繁育与栽培技术研究及产业化示范”(2012BAD55G01), 国家863重大项目“基于全基因组信息的藻类遗传选育”(2012AA10A406), 烟台市科技发展计划项目“药用和食用海藻新种质苗种繁育与栽培技术研究及产业化示范”(2013LGS002)
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为了建立一个重现性好、稳定性高,适用于海带属ISSR遗传分析的PCR反应体系,从海带属配子体材料中提取基因组DNA作为模板,应用正交设计试验对反应体系中各因子的不同浓度进行组合优化。结果显示:适用于海带ISSR扩增反应的最佳体系(20μL)为:1×PCR buffer,1.2 mmol/L Mg2+,0.2 mmol/L d NTPs,1.0μmol/L ISSR引物,40 ng模板DNA,0.25 U Taq DNA聚合酶;扩增PCR程序为:95℃预变性3 min;95℃变性45 s,52℃退
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