【摘 要】
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[目的]初步探讨RPS12基因对于胃癌细胞生长、增殖,细胞周期,凋亡状态等生物学特性及浸润转移能力等影响。[方法]RPS12基因特异的RNA抗体(RNAi)载体通过脂质体介导法转染RPS12
【机 构】
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解放军第309医院消化科,北京,100091
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[目的]初步探讨RPS12基因对于胃癌细胞生长、增殖,细胞周期,凋亡状态等生物学特性及浸润转移能力等影响。[方法]RPS12基因特异的RNA抗体(RNAi)载体通过脂质体介导法转染RPS12基因高表达MKN45细胞,后经G418压力筛选法获得稳定转染的细胞系,经过RT-PCR法及Western-blot法证实。而后使用流式细胞仪、生长曲线法、平板克隆形成实验法、细胞迁徙实验法等方法分析稳定转染株相关生物学特性的变化,每种检测实验均设立RNAi载体转染细胞实验组、点突变对照组、MKN45细胞空白对照组。[结果]稳定转染的RPS12基因RNAi细胞系经过免疫细胞化学法、RT-PCR法及Western-blot法证实,表达抑制率可达68%左右。与对照组细胞相比,实验组细胞株生长减慢,各时间点细胞计数显著低于对照组(P<0.05);各对照组之间无显著差异,流式细胞仪检测细胞周期显示实验组G2-M期比例显著低于对照组,S期比例显著高于对照组(P<0.05),实验组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05)。平板克隆形成实验结果显示RPS12RNA干扰组克隆形成率显著低于对照组(P<0.05);细胞迁徙实验结果提示实验组穿膜率与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]RPS12基因可能具有促进细胞生长增殖作用,同时可影响细胞周期,降低RPS12基因表达可能抑制胃癌细胞的恶性生物学行为。
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