【摘 要】
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为建立鲤春病毒血症病毒(SVCV)的荧光定量RT-PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的SVCV N蛋白基因的保守性序列设计并合成特异性引物,建立了该病毒的SYBR Green Ⅰ荧光定量
【机 构】
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上海市水产研究所上海市水产技术推广站,上海,200433
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为建立鲤春病毒血症病毒(SVCV)的荧光定量RT-PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的SVCV N蛋白基因的保守性序列设计并合成特异性引物,建立了该病毒的SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法.结果表明,以重组质粒标准品构建的标准曲线的相关系数为0.99,在102拷贝/μL～109拷贝/μL范围内具有良好的线性关系.该方法对传染性脾肾坏死病毒、草鱼呼肠孤病毒、传染性皮下及组织坏死病毒和白斑综合征病毒其他水生动物病毒核酸扩增结果均为阴性,特异性强;该方法对SVCV检测下限为100.76 TCID50/mL,比常规PCR灵敏100倍;批内和批间的变异系数均小于7.6％,重复性好.本研究建立的荧光定量RT-PCR方法灵敏度高、特异性强、重复性好,对SVCV的快速检测及定量检测具有重要意义.
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