【摘 要】
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目的 探讨共培养条件下人微血管内皮细胞(HMVEC)对背根神经节细胞(DRGC)增殖的调控机制.方法 分离培养小鼠DRGC,采用Transwell半透膜建立双层细胞共培养体系,实验设DRGC单独
【机 构】
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中国医科大学附属盛京医院骨科,沈阳,110004沈阳市骨科医院;中国医科大学附属第一医院肾内科;
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目的 探讨共培养条件下人微血管内皮细胞(HMVEC)对背根神经节细胞(DRGC)增殖的调控机制.方法 分离培养小鼠DRGC,采用Transwell半透膜建立双层细胞共培养体系,实验设DRGC单独培养组、DRGC与HMVEC共培养组、SU5416组和二甲基亚砜(DMSO)组.SU5416组预先用血管内皮生长因子受体2(Flk-1)抑制剂SU5416处理HMVEC 6 h后再与DRGC共培养.相差显微镜观察各组DRGC生长情况;噻唑蓝(MTT)检测DRGC细胞增殖;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测共培养细胞上清液中血管内皮生长因子(VEGF)、神经生长因子(NGF)的表达;Western blot检测磷酸化Flk-1(p-Flk-1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期素(Cyclin) D1细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)的表达.结果 与DRGC单独培养组比较,HMVEC共培养组DRGC增殖率显著增加,在培养12h后最为明显,增加39.07％ (P ＜0.01),VEGF、NGF、PCNA、Cyclin D1、p-Flk-1、p-ERK1/2表达量明显增加(P＜0.05).DMSO组与共培养组差异无统计学意义(P＞0.05).与DMSO组比较,SU5416组DRGC增殖率显著降低,于培养12 h后下降最明显,降低23.93％(P＜0.01).VEGF、NGF、PCNA、Cyclin D1表达量减少,Flk-1与ERK1/2磷酸化水平降低,p-Flk-1和p-ERK1/2相对表达量分别降低50.69％和23.12％ (P ＜0.01).结论 Flk-1抑制剂可阻断HMVEC共培养对DRGC增殖促进作用,HMVEC共培养可能通过VEGF/Flk-1途径激活ERK/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路,进而促进DRGC增殖.
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