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目的
肝细胞移植可替代部分肝细胞功能及介导基因治疗。腹腔肝细胞移植操作简便,损伤小,但除脾脏、门静脉外,其他部位移植肝细胞不易存活。作者介绍一种用聚羟基乙酸-胶原载体腹腔内移植同种异体肝细胞的方法。
方法将聚羟基乙酸纤维制成直径1cm的棉絮状,浸入提纯的鼠尾胶原24小时;用胶原酶灌注收获SD大鼠单肝细胞,以8×105/ml细胞浓度植入胶原铺底的Costar50ml斜口瓶与聚羟基乙酸-胶原载体培养96小时,构建聚羟基乙酸-胶原载体粘附肝细胞。移植入40%肝切除Wistar大鼠的大网膜内。分别于术后2周、4周、2月处死大鼠,取移植部位病检。移植2月肝细胞用异硫氢胍分离细胞总RNA,人工合成白蛋白,P450b寡核苷酸探针行Northern杂交。
结果肝细胞移植后2周至2月均在网膜移植部位发现肝细胞团,4周时已呈索状排列,肝细胞团周边可见细胞核大的新生细胞,并有分裂相。PAS染色这些肝细胞内有糖原颗粒。这些移植入的肝细胞均有白蛋白,P450b的mRNA表达。
结论利用聚羟基乙酸一胶原载体粘附的肝细胞腹腔内移植易于存活并保持其特异基因表达,参与机体糖、蛋白代谢和生物转化功能。