西瓜花叶病毒HC-Pro基因在毕赤酵母中的分泌表达与功能研究

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利用RT—PCR方法扩增出西瓜花叶病毒HC-Pro的基因,长度为1371bp,并构建了真核表达质粒pPIC9K—WHC。将重组质粒经SalI单酶切后电转化PichiapastorisGS115菌株,经PCR鉴定与CA18、MD和MM培养基筛选,获得Mut^+/His^+表型高拷贝转化子。经1%甲醇诱导5d后,SDS—PAGE检测发酵液上清,在66kD处有一特异蛋白条带表达。Western blot鉴定表明,表达蛋白可以和HC—Pro蛋白抗血清发生结合反应。Far-Western blot证明该蛋白能与西瓜
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