【摘 要】
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目的 探讨长链非编码RNA （LncRNA） MIR22HG通过微小RNA-9-3p （miR-9-3p）调节细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4 （CTLA4）抑制前列腺癌的机制。方法 收集26例前列腺癌组织样本和26例前列腺增生组织样本，培养VCAP、PC3、LNCap和DU145细胞。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测前列腺癌组织、前列腺增生组织及4种前列腺癌细胞的MIR22HG和m
【机 构】
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南通大学第二附属医院/江苏省南通市第一人民医院泌尿外科
【基金项目】
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江苏省南通市卫健委课题（QA2019014）； 江苏省南通市基础研究和民生科技计划指导性项目（JCZ21078）；
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目的 探讨长链非编码RNA （LncRNA） MIR22HG通过微小RNA-9-3p （miR-9-3p）调节细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4 （CTLA4）抑制前列腺癌的机制。方法 收集26例前列腺癌组织样本和26例前列腺增生组织样本，培养VCAP、PC3、LNCap和DU145细胞。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测前列腺癌组织、前列腺增生组织及4种前列腺癌细胞的MIR22HG和miR-9-3p mRNA水平。筛选MIR22HG和miR-9-3p mRNA表达较高的细胞。将筛选出的细胞按不同干预方法分为OE-CTLA4（CTLA4过表达组）、OE-MIR22HG（MIR22HG过表达组）、miR-9-3p mimic（miR-9-3p过表达组）、OE-MIR22HG+miR-9-3p mimic（MIR22HG及miR-9-3p联合过表达组）、OE-NC+NC mimic（转染对照组）、NC mimic （miR-9-3p过表达对照组）。采用TargetScan数据库及荧光素酶报告基因实验验证MIR22HG与miR-9-3p及miR-9-3p与CTLA4是否存在靶向抑制关系。采用qRT-PCR及Western blot检测各组细胞MIR22HG和miR-9-3p mRNA及CTLA4蛋白表达。取裸鼠96只，按干预方法不同分为OE-NC+NC mimic组（转染对照）、OE-MIR22HG组（MIR22HG过表达）及OE-MIR22HG+miR-9-3p mimic组（MIR22HG及miR-9-3p联合过表达）,每组32只。接种后4周期间，每周检测小鼠原位移植瘤并统计瘤体的质量和体积变化。结果 前列腺癌细胞VCAP、PC3、LNCap和DU145细胞中，PC3细胞MIR22HG mRNA相对较低，miR-9-3p mRNA相对较高，因此选择PC3细胞进行研究。在PC3细胞中成功过表达MIR22HG,荧光素酶报告基因实验验证了MIR22HG和miR-9-3p的靶向抑制关系，过表达MIR22HG, miR-9-3p表达下调，差异有统计学意义（P＜0.05）。TargetScan数据库预测免疫基因CTLA4和miR-9-3p的靶向关系，荧光素酶报告基因实验验证miR-9-3p和CTLA4的靶向抑制关系，过表达miR-9-3p,CTLA4表达上调，差异有统计学意义（P＜0.05）。过表达MIR22HG的裸鼠皮下肿瘤的质量降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。OE-MIR22HG+miR-9-3p mimic组裸鼠皮下肿瘤的质量、体积与OE-NC+NC mimic组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 MIR22HG与miR-9-3p存在靶向负调节关系，miR-9-3p与CTLA-4存在靶向调节关系，MIR22HG/miR-9-3p可能通过抑制CTLA4达到免疫治疗前列腺癌的目的。
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