EMA-RTQ-PCR快速鉴别沙门菌死活细胞方法的建立

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目的利用EMA(Ethidium Monoazide)能选择性与死细胞DNA非可逆共价结合的特性,建立EMA-RTQ-PCR方法快速鉴别沙门菌死活细胞。方法选择300μl、3.3×108 CFU/ml沙门菌灭活条件;检测RTQ-PCR的灵敏度与特异性;选择能抑制3.3×108CFU/ml死细胞DNA扩增的EMA浓度,观察该浓度EMA对活菌扩增的影响。结果灭活条件为65℃、10 min;RTQ-PCR检测沙门菌的灵敏度为25 CFU,特异性好;30μg/ml的EMA可抑制3.3×108CFU沙门菌死细胞DNA的扩增;30μg/ml的EMA对活菌扩增的影响可通过离心消除;活菌数/死菌数≥40%时,可以检出活菌;当活菌数量足够大时,死菌的存在不影响实验结果。结论本研究建立的快速鉴别沙门菌死活细胞EMA-RTQ-PCR方法可行,能有效避免单纯PCR检测沙门菌产生的假阳性结果。
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