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【摘要】 目的：研究狼毒大戟石油醚提取物和乙酸乙酯提取物对小鼠的半数致死量（LD50）。方法：150只昆明种小鼠，完全随机平均分组，每组10只。腹腔注射给药，分别给予不同浓度的狼毒大戟石油醚提取物和乙酸乙酯提取物，以小鼠急性死亡率为指标，求狼毒大戟石油醚提取物和乙酸乙酯提取物的半数致死量（LD50）和LD50的95%可信区间。结果：狼毒大戟石油醚提取物和乙酸乙酯提取物对小鼠的半数致死量（LD50）分别为31.03 mg/kg、1538.58 mg/kg。结论：狼毒大戟石油醚和乙酸乙酯提取物具有一定的毒性，实验结果为进一步研究和开发狼毒大戟提供了毒性依据。
【关键词】 狼毒大戟； 石油醚； 乙酸乙酯； 小鼠； 半数致死量
狼毒大戟又名东北狼毒，为大戟科植物狼毒大戟（Eup-horbia fischeriana Steud.）的干燥根，是中药狼毒的主流商品之一，俗称猫眼草。据《本草纲目》的引证，狼毒在《神农本草经》、南北朝时期陶弘景的《本经集注》和《名医别录》、唐代苏恭的《唐本草》等著作中均有记载[1]。其味辛，性平，有毒。经过现代西医和中医的大量研究，已证实其具有良好的抗肿瘤活性成分[2]。2000年，赵奎君等分别使用狼毒大戟根的水、甲醇、醋酸乙酯、氯仿和石油醚的5种提取物对结核杆菌进行了体外抑菌实验[3]。实验结果显示，通过这5种方法提取的成分均有不同程度的抑菌作用，其中以石油醚提取物抑菌作用最强。其次是氯仿、醋酸乙酯。近年来，随着科学进步，肿瘤的发生机制研究与阐明、抗肿瘤靶点的寻找与确定、新型抗肿瘤药物的研发与应用均有突破性的进展，其中以纳米分子医学和分子生物学技术的发展尤为突出[4-5]。基于对狼毒大戟的研究，期望能在纳米分子水平层面做出重要的发现。因此，对于狼毒大戟的毒性研究极为必要与重要。现今抗肿瘤药物大部分还是依靠细胞毒性来发挥作用，在对抗肿瘤细胞的同时，对机体的正常细胞也存在着杀伤作用，因此，发现高效低毒的抗肿瘤新药成为当今社会的热点问题。有文献显示，狼毒大戟的石油醚和乙酸乙酯提取物的浓度为100 μg/ml时，对SGC-7901、HT-29、HeLa三种肿瘤细胞均有显著的抑制作用，其抑制率分别为56.48%，52.61%，45.37%和 52.19%，48.73%，50.12%[6]。但对于它们的毒性作用还未发现具体研究。本实验以狼毒大戟为代表，以昆明种近交系小鼠为实验对象，通过腹腔注射法，分别研究了狼毒大戟石油醚和乙酸乙酯提取物对小鼠的半数致死量。
1 材料与方法
1.1 材料 昆明种小白鼠共150只，体重（22±2）g，雌雄各半，由大连医科大学实验动物中心提供。提供。实验室温度（20±2）℃，湿度（65±15）%。狼毒大戟石油醚提取物和乙酸乙酯提取物，齐齐哈尔医学院提供。
1.2 实验方法
1.2.1 药物制备 取浸膏状态的狼毒大戟石油醚提取物，用植物油配制好溶液，取干燥的狼毒大戟乙酸乙酯提取物，用水溶解。采用梯度稀释法依次稀释，得到药物的各剂量组溶液。
1.2.2 LD50测定 经过预实验，测定小鼠狼毒大戟石油醚提取物的Dm、Dn值，取150只体重为（20±2）g的健康昆明种小鼠，雌雄各半，完全随机分组，每组10只。于实验前禁食不禁水12 h。设石油醚组为80只，每组分别给予石油醚提取物10.70、14.27、19.03、25.37、33.83、45.10、60.13和80.17 mg/kg乙酸乙酯组为70只，每组分别给予乙酸乙酯提取物800、1060、1410、1875、2500、3330和4440 mg/kg，行小鼠腹腔注射，注射量为0.4 ml/20 g。染毒后观察7 d，记录各组小鼠中毒症状、死亡时间和死亡数。按改良寇氏法公式计算各组LD50及95%可信区间。
1.3 统计学处理 运用Excel软件，按改良寇氏法公式计算各组LD50及95%可信区间。
2 结果
2.1 各组小鼠腹腔注射药物后的急性毒性实验结果见表1、2，LD50统计结果见表3。
2.2 毒性反应 采用腹腔注射法给药后，多数小鼠出现精神萎靡、行动迟缓、厌食、身体发抖、外界的敏感性减弱等中毒症状；濒死小鼠出现挣扎，呼吸困难等症状；死亡小鼠经尸解肉眼观察，肝脏、脾脏轻微增大。
3 讨论
从表3中可知狼毒大戟石油醚提取物的LD50为31.03 mg/kg，95%可信限为25.96～37.09；狼毒大戟乙酸乙酯提取物的LD50为1538.58 mg/kg，95%可信限为1294.59～1828.56。该实验结果提示狼毒大戟石油醚和乙酸乙酯提取物具有一定的毒性，在对其进行新药开发时应考虑其安全性评价。
参考文献
[1] 章振东，徐德昌.狼毒大戟的研究进展[J].中国甜菜糖业，2007，45（4）：26-28.
[2] 李杰，张静.中药狼毒抗癌作用研究进展[J].中医研究，1996，9（5）：44-46.
[3] 赵奎君，杨隽，张浦芝.5种狼毒大戟提取物对结核杆菌抗菌作用的比较[J].时珍国医国药，2000，11（7）：589-590.
[4] T.Takashi，N.Mikihiko，T.Akihiro，et al.Molecular Targeting Therapy of Cancer：Drug resistance，Apoptosis and Survival Signal[J].Cancer Sci，2003，94（1）：15-21.
[5] R.P.Araujo，D.Connemara，Lance A.Liotta，et al.Network-targeted Combination Therapy： A New Concept in Cancer Treatment[J].Drug Discovery Today：Therapeutic Strategies，2004，1（4）：425-433.
[6] 章振东.狼毒大戟抗肿瘤活性成分的提取分离及结构鉴定[D].哈尔滨工业大学，2007.
（收稿日期：2012-09-07） （本文编辑：李静）
【关键词】 狼毒大戟； 石油醚； 乙酸乙酯； 小鼠； 半数致死量
狼毒大戟又名东北狼毒，为大戟科植物狼毒大戟（Eup-horbia fischeriana Steud.）的干燥根，是中药狼毒的主流商品之一，俗称猫眼草。据《本草纲目》的引证，狼毒在《神农本草经》、南北朝时期陶弘景的《本经集注》和《名医别录》、唐代苏恭的《唐本草》等著作中均有记载[1]。其味辛，性平，有毒。经过现代西医和中医的大量研究，已证实其具有良好的抗肿瘤活性成分[2]。2000年，赵奎君等分别使用狼毒大戟根的水、甲醇、醋酸乙酯、氯仿和石油醚的5种提取物对结核杆菌进行了体外抑菌实验[3]。实验结果显示，通过这5种方法提取的成分均有不同程度的抑菌作用，其中以石油醚提取物抑菌作用最强。其次是氯仿、醋酸乙酯。近年来，随着科学进步，肿瘤的发生机制研究与阐明、抗肿瘤靶点的寻找与确定、新型抗肿瘤药物的研发与应用均有突破性的进展，其中以纳米分子医学和分子生物学技术的发展尤为突出[4-5]。基于对狼毒大戟的研究，期望能在纳米分子水平层面做出重要的发现。因此，对于狼毒大戟的毒性研究极为必要与重要。现今抗肿瘤药物大部分还是依靠细胞毒性来发挥作用，在对抗肿瘤细胞的同时，对机体的正常细胞也存在着杀伤作用，因此，发现高效低毒的抗肿瘤新药成为当今社会的热点问题。有文献显示，狼毒大戟的石油醚和乙酸乙酯提取物的浓度为100 μg/ml时，对SGC-7901、HT-29、HeLa三种肿瘤细胞均有显著的抑制作用，其抑制率分别为56.48%，52.61%，45.37%和 52.19%，48.73%，50.12%[6]。但对于它们的毒性作用还未发现具体研究。本实验以狼毒大戟为代表，以昆明种近交系小鼠为实验对象，通过腹腔注射法，分别研究了狼毒大戟石油醚和乙酸乙酯提取物对小鼠的半数致死量。
1 材料与方法
1.1 材料 昆明种小白鼠共150只，体重（22±2）g，雌雄各半，由大连医科大学实验动物中心提供。提供。实验室温度（20±2）℃，湿度（65±15）%。狼毒大戟石油醚提取物和乙酸乙酯提取物，齐齐哈尔医学院提供。
1.2 实验方法
1.2.1 药物制备 取浸膏状态的狼毒大戟石油醚提取物，用植物油配制好溶液，取干燥的狼毒大戟乙酸乙酯提取物，用水溶解。采用梯度稀释法依次稀释，得到药物的各剂量组溶液。
1.2.2 LD50测定 经过预实验，测定小鼠狼毒大戟石油醚提取物的Dm、Dn值，取150只体重为（20±2）g的健康昆明种小鼠，雌雄各半，完全随机分组，每组10只。于实验前禁食不禁水12 h。设石油醚组为80只，每组分别给予石油醚提取物10.70、14.27、19.03、25.37、33.83、45.10、60.13和80.17 mg/kg乙酸乙酯组为70只，每组分别给予乙酸乙酯提取物800、1060、1410、1875、2500、3330和4440 mg/kg，行小鼠腹腔注射，注射量为0.4 ml/20 g。染毒后观察7 d，记录各组小鼠中毒症状、死亡时间和死亡数。按改良寇氏法公式计算各组LD50及95%可信区间。
1.3 统计学处理 运用Excel软件，按改良寇氏法公式计算各组LD50及95%可信区间。
2 结果
2.1 各组小鼠腹腔注射药物后的急性毒性实验结果见表1、2，LD50统计结果见表3。
2.2 毒性反应 采用腹腔注射法给药后，多数小鼠出现精神萎靡、行动迟缓、厌食、身体发抖、外界的敏感性减弱等中毒症状；濒死小鼠出现挣扎，呼吸困难等症状；死亡小鼠经尸解肉眼观察，肝脏、脾脏轻微增大。
3 讨论
从表3中可知狼毒大戟石油醚提取物的LD50为31.03 mg/kg，95%可信限为25.96～37.09；狼毒大戟乙酸乙酯提取物的LD50为1538.58 mg/kg，95%可信限为1294.59～1828.56。该实验结果提示狼毒大戟石油醚和乙酸乙酯提取物具有一定的毒性，在对其进行新药开发时应考虑其安全性评价。
参考文献
[1] 章振东，徐德昌.狼毒大戟的研究进展[J].中国甜菜糖业，2007，45（4）：26-28.
[2] 李杰，张静.中药狼毒抗癌作用研究进展[J].中医研究，1996，9（5）：44-46.
[3] 赵奎君，杨隽，张浦芝.5种狼毒大戟提取物对结核杆菌抗菌作用的比较[J].时珍国医国药，2000，11（7）：589-590.
[4] T.Takashi，N.Mikihiko，T.Akihiro，et al.Molecular Targeting Therapy of Cancer：Drug resistance，Apoptosis and Survival Signal[J].Cancer Sci，2003，94（1）：15-21.
[5] R.P.Araujo，D.Connemara，Lance A.Liotta，et al.Network-targeted Combination Therapy： A New Concept in Cancer Treatment[J].Drug Discovery Today：Therapeutic Strategies，2004，1（4）：425-433.
[6] 章振东.狼毒大戟抗肿瘤活性成分的提取分离及结构鉴定[D].哈尔滨工业大学，2007.
（收稿日期：2012-09-07） （本文编辑：李静）