【摘 要】
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采用差速离心、膜包超滤浓缩和Sepharose 4 Fast Flow(4FF)凝胶层析相结合的策略纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),建立了一种温和纯化PRRSV的方法。通过SDS-PAGE、Western-blo
【机 构】
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河南农业大学牧医工程学院; 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31272546);河南省农科院科研发展专项资金项目(20148405)
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采用差速离心、膜包超滤浓缩和Sepharose 4 Fast Flow(4FF)凝胶层析相结合的策略纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),建立了一种温和纯化PRRSV的方法。通过SDS-PAGE、Western-blot和检测病毒含量、蛋白含量等方法分析纯化效果。用纯化后的病毒免疫BALB/c雌性小鼠,通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测其免疫原性,并与超速离心沉淀病毒的纯化方法相比较,评估纯化病毒的免疫效果。结果显示,4FF纯化后的病毒TCID50提高了50倍,与超离方法相比,4FF纯化法将病毒原液杂蛋白的去除比率由97.51%提高到99.68%,SDS-PAGE显示未见明显杂蛋白条带,IPMA结果显示4FF纯化病毒的免疫原性较好,特异性较强,消除了免疫后小鼠血清与Marc-145细胞蛋白的非特异性反应。结果表明,4FF纯化方法优于超离纯化方法,前者的建立为制备单克隆抗体和规模化纯化PRRSV疫苗的工艺开发奠定基础。
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