【摘 要】
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目的 建立榛子过敏原双抗夹心酶联免疫吸附法(sandwich enzyme-linked immunosorbent assay,sELISA)快速检测食品中微量榛子的方法.方法 对两株抗体进行配对,确定捕获抗体和检测抗体,利用棋盘法确定捕获抗体、检测抗体、辣根过氧化物酶标记的兔抗大鼠IgG(horseradish peroxidase-IgG,HRP-IgG)的最佳稀释浓度,然后对各工作步骤的孵育时间进行优化,并应用于实际食品的检测.结果 使用兔抗作为捕获抗体,鼠抗作为检测抗体,兔抗血清稀释度为1:10
【机 构】
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中国海洋大学食品科学与工程学院,青岛 266000;中国检验检疫科学研究院农产品安全研究中心,北京 100176
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目的 建立榛子过敏原双抗夹心酶联免疫吸附法(sandwich enzyme-linked immunosorbent assay,sELISA)快速检测食品中微量榛子的方法.方法 对两株抗体进行配对,确定捕获抗体和检测抗体,利用棋盘法确定捕获抗体、检测抗体、辣根过氧化物酶标记的兔抗大鼠IgG(horseradish peroxidase-IgG,HRP-IgG)的最佳稀释浓度,然后对各工作步骤的孵育时间进行优化,并应用于实际食品的检测.结果 使用兔抗作为捕获抗体,鼠抗作为检测抗体,兔抗血清稀释度为1:10000(V:V)、鼠抗血清稀释度为1:10000(V:V)、HRP-兔抗大鼠稀释度为1:20000(V:V).各步骤最佳反应时间为抗原孵育30 min、检测抗体孵育30 min、酶标二抗孵育45 min及四甲基联苯胺(3,3\',5,5\'-tetramethylbenzidine,TMB)显色8 min.此方法的线性回归方程为Y=0.4504 ln(X)+2.1194,r2=0.9934,定量限为10 ng/mL、检出限为0.1 ng/mL.该方法特异性强,仅与核桃产生轻微的交叉反应,在面包、酸奶和咖啡基质中的回收率在80％到120％之间,批内、批间变异系数均小于15％.结论 本方法具有较高的灵敏度和特异性,适用于商业加工食品中榛子残留的快速、准确检测.
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