【摘 要】
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目的探索CCK-8法检测小鼠脾淋巴细胞增殖的最佳条件。方法采用交叉设计或两因素完全随机设计探索分裂素刀豆蛋白(ConA)或脂多糖(LPS)刺激的脾细胞增殖实验的细胞制备方法、细
【机 构】
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无限极中草药免疫研究中心,中山大学药学院,中山大学实验动物中心,
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目的探索CCK-8法检测小鼠脾淋巴细胞增殖的最佳条件。方法采用交叉设计或两因素完全随机设计探索分裂素刀豆蛋白(ConA)或脂多糖(LPS)刺激的脾细胞增殖实验的细胞制备方法、细胞浓度、分裂素浓度、刺激时间、培养基中胎牛血清(FBS)浓度、是否预培养等条件。结果制备方法中以轻压制备的脾细胞增殖率高于轻磨;脾细胞浓度以5×106/m L为最佳;ConA浓度为2、5、10μg/m L,LPS浓度为10、20、50μg/m L细胞增殖率未见明显差异;刺激时间在48和72 h间脾细胞增殖率未见明显差异;用含10%、15%和20%FBS的培养基培养的脾细胞增殖率未见明显差异;制备的脾细胞当天刺激比第二天刺激增殖率更高。结论 ConA和LPS刺激的Balb/C小鼠脾细胞增殖实验的最佳条件为,轻压制备脾细胞,脾细胞浓度为5×106/m L,制备当天直接种板,ConA的刺激浓度为2~10μg/m L,LPS的刺激浓度为10~50μg/m L。
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