【摘 要】
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目的:克隆人IL-18基因,并构建高表达人IL-18的工程菌,纯化获得重组人IL-18.方法:从人肿瘤组织内提取总RNA,利用逆转录聚合酶链反应扩增人IL-18基因,在基因的5′和3′端分别加
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目的:克隆人IL-18基因,并构建高表达人IL-18的工程菌,纯化获得重组人IL-18.方法:从人肿瘤组织内提取总RNA,利用逆转录聚合酶链反应扩增人IL-18基因,在基因的5′和3′端分别加上NcoI和EcoRI酶切位点,酶切后直接克隆至质粒表达载体pET28a(+)内,转化大肠杆菌BL21(DE3),挑选转化子,IPTG诱导后SDS-PAGE筛选高表达人IL-18的工程菌.提取表达菌质粒进行DNA序列分析.表达菌大量培养及IPTG诱导后,超声破菌收集包涵体,十二烷基肌苷酸钠溶解后用阳离子柱和分子筛纯化
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