【摘 要】
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目的探讨miR-223通过调控花生四烯酸12-脂加氧酶（ALOX12）的表达对胃癌细胞铁死亡的影响。方法收集2016-09-13-2018-11-25北京市朝阳区桓兴肿瘤医院胃肠内科23例胃癌患者癌和癌旁组织（距癌周≥5 cm）。人胃癌细胞系MKN45、MGC803和NCI-N87,以及人正常乳腺上皮细胞系MCF10A和胃黏膜细胞系GES-1均购自上海中科院细胞库。利用定量逆转录聚合酶链反应（RT
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目的探讨miR-223通过调控花生四烯酸12-脂加氧酶（ALOX12）的表达对胃癌细胞铁死亡的影响。方法收集2016-09-13-2018-11-25北京市朝阳区桓兴肿瘤医院胃肠内科23例胃癌患者癌和癌旁组织（距癌周≥5 cm）。人胃癌细胞系MKN45、MGC803和NCI-N87,以及人正常乳腺上皮细胞系MCF10A和胃黏膜细胞系GES-1均购自上海中科院细胞库。利用定量逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）和蛋白质印迹法检测ALOX12的表达水平和miR-223的相对表达量。分别用miR-223-agomir、miR-223-antagomir+miR-223-agomir和miR-223-NC转染MKN45细胞,空白培养细胞做对照组。MTT法测定细胞活力。双荧光素酶实验验证ALOX12与miR-223的互作关系。20μmol/L铁死亡诱导剂Erastin给药胃癌MKN45细胞检测miR-223对细胞铁死亡的影响。结果 ALOX12在胃癌组织中的表达量低于癌旁正常组织,t=-8.205,P=0.014;miR-233在胃癌组织中的表达量高于癌旁正常组织,t=5.699,P=0.018。同样,ALOX12在胃癌细胞MKN45、MGC803和NCI-N87中的表达量相对于人正常乳腺上皮细胞系MCF10A和胃黏膜细胞系GES-1下调,F=41.720,P<0.001,且ALOX12的蛋白水平检测结果与转录水平一致。miR-233在MKN45、MGC803和NCI-N87中的表达量与GES-1和MCF10A相比上调,F=74.639,P<0.001。双荧光素酶实验显示,ALOX12是miR-223的靶基因,且通过对癌组织中miR-233和ALOX12的表达量进行分析,发现其具有负相关性,r=-0.613,P=0.002。在转染miR-223-agomir后MKN45细胞中的ALOX12蛋白表达下调,而miR-223-agomir与miR-223-antagomir的共转染则部分回补了ALOX12的表达;miR-223过表达可增强MKN45细胞的增殖能力,F=7.010,P=0.027;铁死亡诱导剂Erastin处理实验发现miR-223减缓MKN45细胞中p53介导的铁死亡过程。结论 miR-223通过抑制ALOX12表达促进胃癌的发生与发展,而miR-223与ALOX12在铁死亡过程中的具体机制还需要进一步的研究。
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