【摘 要】
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以BmNPV复制必需的DNA解旋酶基因和DNA聚合酶基因为靶序列,人工设计并合成了长度分别为435(Ap1),300(Ap2)和399 bp(AH)的dsRNAs,利用TransMessengerTM Transfection Reagent
【机 构】
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浙江大学生物化学研究所,浙江理工大学生物化学研究所
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以BmNPV复制必需的DNA解旋酶基因和DNA聚合酶基因为靶序列,人工设计并合成了长度分别为435(Ap1),300(Ap2)和399 bp(AH)的dsRNAs,利用TransMessengerTM Transfection Reagent转染家蚕细胞,研究其对BmNPV复制的抑制效果.结果表明,在野生型病毒BmNPV感染家蚕细胞实验中,Ap2和AH这2个dsRNA能够有效地抑制病毒DNA的复制,并且在转染dsRNA后第4天抑制效果最佳,它们使病毒滴度(PFU/mL值)降低了103～104,而另外的dsRNA(Ap1)没有明显的抑制效果.RT-PCR和DNA斑点杂交也证实了2种目的基因的表达水平和病毒DNA的量发生了明显的下调.此外,用荧光显微镜观察dsRNA在细胞内的定位,发现在转染24 h后dsRNA开始在细胞核的周围呈不连续的聚集状态.
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