【摘 要】
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目的:研究肺癌细胞能否直接影响CD4+T细胞干扰素-γ(IFN-γ)基因启动子甲基化水平。方法:ELISA法检测肺癌组(n=30)及健康对照组(n=30)血浆IFN-γ水平;免疫磁珠分选两组外周血
【机 构】
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南京医科大学第一附属医院检验学部,国家临床检验重点专科建设单位,
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目的:研究肺癌细胞能否直接影响CD4+T细胞干扰素-γ(IFN-γ)基因启动子甲基化水平。方法:ELISA法检测肺癌组(n=30)及健康对照组(n=30)血浆IFN-γ水平;免疫磁珠分选两组外周血CD4+T细胞(n=8),提取DNA后经亚硫酸氢盐修饰,PCR扩增IFN-γ基因启动子进行TA克隆测序,测序结果采用生物信息学软件进行分析;建立健康人CD4+T细胞与肺腺癌细胞株SPC-A1体外Transwell共培养体系(n=6),并设健康人CD4+T细胞单独培养为对照组,培养5 d后分别收集CD4+T细胞。CD4+T细胞按上述法进行TA克隆测序。同时CD4+T细胞经anti-CD3、anti-CD28刺激6、24 h,ELISA法检测两组上清IFN-γ表达水平,RT-PCR检测CD4+T细胞IFN-γmRNA表达水平。结果:肺癌组血浆IFN-γ水平显著低于健康对照组[(69.30±38.56)pg/ml vs(92.62±34.75)pg/ml,P=0.017];肺癌组CD4+T细胞IFN-γ基因启动子甲基化水平显著高于健康对照组(84.6%vs 68.6%,P<0.001);肺癌患者血浆IFN-γ水平与其基因启动子甲基化率呈负相关(r=-0.850 3,P=0.010 7)。体外Transwell共培养实验中,与对照组相比,实验组CD4+T细胞anti-CD3、anti-CD28刺激6、24 h,IFN-γ表达水平显著下降[6 h:(14.53±7.12)pg/ml vs(36.14±23.51)pg/ml,24 h:(7.81±4.02)pg/ml vs(24.85±15.58)pg/ml],6 h对照组CD4+T细胞IFN-γmRNA表达水平为实验组的2.37倍。实验组CD4+T细胞IFN-γ基因启动子甲基化水平显著高于对照组(85.4%vs70.9%)。结论:肺癌细胞可诱导CD4+T细胞IFN-γ基因启动子发生高甲基化,进而导致IFN-γ基因表达下调,可能对肺癌患者的免疫抑制起重要作用。
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