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目的
评价线粒体钙单向转运体(MCU)在氧糖剥夺-复氧复糖SH-SY5Y细胞线粒体自噬中的作用。
方法离体培养SH-SY5Y细胞,以2×105个/ml的密度接种于96孔培养板,采用随机数字表法分为4组(n=6):对照组(C组)、氧糖剥夺-复氧复糖组(OGD/R组)、氧糖剥夺-复氧复糖+MCU抑制剂组(OGD/R+Ru360组)和MCU抑制剂组(Ru360组)。C组正常培养;OGD/R组行氧糖剥夺6 h后,复氧复糖24 h;OGD/R+Ru360组氧糖剥夺前30 min加入Ru360,终浓度为10 μmol/L,其余处理同OGD/R组;Ru360组加入Ru360,终浓度为10 μmol/L,30 min后恢复正常培养。于复氧复糖24 h时采用CCK-8法检测细胞存活率;JC-1法检测细胞线粒体膜电位(MMP);透射电镜下观察细胞超微结构;Western blot法检测线粒体自噬相关蛋白p62、Tom20和Beclin-1的表达。
结果与C组比较,Ru360组各项指标差异无统计学意义(P>0.05),OGD/R组细胞存活率和MMP下降,Tom20和p62表达下调,Beclin-1表达上调(P<0.01),线粒体肿胀,线粒体自噬体增多;与OGD/R组比较,OGD/R+Ru360组细胞存活率和MMP升高,Tom20和p62表达上调,Beclin-1表达下调(P<0.01),线粒体形态较完整,线粒体自噬体数量减少。
结论MCU参与了氧糖剥夺-复氧复糖SH-SY5Y细胞线粒体自噬的过程。