【摘 要】
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目的探讨抑制Sema 4D介导的成骨前体细胞AKT磷酸化水平上调在乳腺癌骨转移中的作用。方法通过siRNA技术构建稳定的Sema 4D低表达人乳腺癌MCF-7细胞株,采用实时荧光定量PCR检
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目的探讨抑制Sema 4D介导的成骨前体细胞AKT磷酸化水平上调在乳腺癌骨转移中的作用。方法通过siRNA技术构建稳定的Sema 4D低表达人乳腺癌MCF-7细胞株,采用实时荧光定量PCR检测细胞Sema 4D mRNA表达,MTT法检测各组细胞增殖能力,Transwell法检测各组细胞侵袭能力;采用Transwell小室建立成骨细胞和乳腺癌细胞的共培养体系,茜素红染色实验检测骨矿化能力,Western blot检测AKT、p-AKT蛋白表达。结果 MCF-7细胞Sema 4D mRNA相对表达量显著高于Hs578Bst细胞(P<0.05)。Sema 4D siRNA转染后,Sema 4D siRNA组Sema 4D mRNA相对表达量显著低于Control组和NC组(均P<0.05),Control组和NC组Sema 4D mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Sema 4D siRNA组细胞增殖率显著低于NC组和Control组(均P<0.05),Sema 4D siRNA组细胞侵袭率亦显著低于NC组和Control组(均P<0.05)。MCF-7+OM组和Sema 4D siRNA+OM组骨结节面积显著低于Control+OM组(均P<0.05),Sema 4D siRNA+OM组骨结节面积显著高于MCF-7+OM组(均P<0.05)。Control+OM组、MCF-7+OM组、Sema 4D siRNA+OM组AKT蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);MCF-7+OM组和Sema 4D siRNA+OM组p-AKT蛋白表达水平显著低于Control+OM组(均P<0.05),Sema4D siRNA+OM组p-AKT蛋白表达水平显著高于MCF-7+OM组(P<0.05)。结论人乳腺癌细胞系MCF-7 Sema4D表达显著上调,并与细胞增殖、侵袭等生物学行为有关;下调Sema 4D表达,能够提高AKT磷酸化水平,减弱对成骨细胞分化的抑制作用。
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