探讨同型半胱氨酸诱导内质网应激诱导的泛素样结构域1蛋白（Herpud1）在同型半胱氨酸（Hcy）诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞（VSMC）表型转化中的作用。
方法取雄性Sprague Dawley大鼠胸主动脉，改良组织贴块法分离VSMC并进行培养，取第4~7代的VSMC用于实验。为明确Hcy能否诱导VSMC发生表型转化，将VSMC分为4组，即对照组以及Hcy100、500和1 000 μmol/L组。为明确内质网应激（ERS）是否参与VSMC表型转化，将VSMC分为3组，即对照组、Hcy500 μmol/L组（Hcy组）和Hcy+4-苯基丁酸钠盐（4-PBA）2 mg/ml组（Hcy+4-PBA组）。为进一步验证Herpud1在VSMC表型转化中的作用，将VSMC分为对照组、Hcy组、Hcy+siRNA阴性对照（scrambled）组和Hcy+Herpud1 siRNA组。免疫荧光法观察VSMC形态学变化和Herpud1蛋白改变。Western blot法检测VSMC表型转化相关标志蛋白骨桥蛋白、钙调节蛋白（Calponin）、平滑肌肌球蛋白重链（SM-MHC），ERS相关蛋白C/EBP同源蛋白（CHOP）、丝氨酸/苏氨酸-蛋白激酶/内切核糖核酸酶肌醇需要酶1（IRE-1）、葡萄糖调节蛋白质78（GRP78）以及Herpud1蛋白的表达水平。实时荧光定量PCR法检测VSMC Herpud1 mRNA的表达水平。
结果（1）不同浓度Hcy对VSMC表型转化的影响：免疫荧光结果示，对照组VSMC成长梭形，肌丝明显，成束状分布，极性明显；干预24 h后，Hcy100 μmol/L组可见VSMC不同程度地变成椭圆形，肌丝分布紊乱，但仍具有一定极性；干预24 h后，Hcy500 μmol/L组VSMC肌丝不明显、极性缺失，而Hcy1 000 μmol/L组VSMC改变则与Hcy100 μmol/L组类似。Western blot结果显示，Hcy100 μmol/L组VSMC骨桥蛋白表达水平高于对照组，SM-MHC表达水平则低于对照组（P均<0.05）；Hcy500 μmol/L组VSMC骨桥蛋白表达水平高于Hcy 100 μmol/L组，Calponin和SM-MHC表达水平则低于Hcy100 μmol/L组（P均<0.05），而Hcy1 000 μmol/L组以上改变趋势不如500 μmol/L明显。（2）ERS在VSMC表型转化中的作用：干预24 h后，Hcy100、500和1 000 μmol/L组VSMC CHOP、IRE-1和GRP78蛋白表达水平均高于对照组（P均<0.05）。Hcy+4-PBA组VSMC CHOP、IRE-1和GRP78蛋白表达水平低于Hcy组（P均<0.05）。而且，Hcy+4-PBA组VSMC骨桥蛋白表达水平亦低于Hcy组（P<0.05），Calponin和SM-MHC蛋白的表达水平则高于Hcy组（P均<0.05）。（3）Herpud1在Hcy诱导的VSMC表型转化中的表达：干预24 h后，Hcy100、500和1 000 μmol/L组VSMC Herpud1蛋白表达水平均高于对照组（P均<0.05），且具有浓度依赖性。干预12 h后，Hcy（500 μmol/L）组VSMC Herpud1升高最为明显，干预48 h后开始下降。Hcy组VSMC Herpud1 mRNA表达水平在0.5、1、2、6、12、24 h均高于对照组（P均<0.05），且具有一定的时间依赖性，以12 h最为明显；Hcy+4-PBA组VSMC Herpud1 mRNA表达水平在上述各时点均低于Hcy组。免疫荧光染色显示，对照组、Hcy组和Hcy+4-PBA组Herpud1均主要分布在细胞浆中的内质网，细胞核也有少量分布。Hcy组VSMC Herpud1蛋白表达水平高于对照组（P<0.05），Hcy+4-PBA组则低于Hcy组（P<0.01）。（4）抑制Herpud1对Hcy诱导的VSMC表型转化的影响：Hcy+Herpud1 siRNA组VSMC骨桥蛋白表达水平低于Hcy+siRNA阴性对照组（P<0.05），Calponin和SM-MHC蛋白表达水平则均高于Hcy+siRNA阴性对照组（P均<0.05）。
结论Herpud1在Hcy诱导的VSMC表型转化具有重要作用。