【摘 要】
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目的获得人线粒体肌酸激酶广泛型亚型(uMtCK)的全长基因,在大肠埃希菌中表达,研制抗uMtCK多克隆抗体.方法采用逆转录PCR从培养的肿瘤细胞(Hela细胞)中成功扩增出1 062 bp的uM
【机 构】
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第二军医大学长征医院实验诊断科、全军临床免疫中心
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目的获得人线粒体肌酸激酶广泛型亚型(uMtCK)的全长基因,在大肠埃希菌中表达,研制抗uMtCK多克隆抗体.方法采用逆转录PCR从培养的肿瘤细胞(Hela细胞)中成功扩增出1 062 bp的uMtCK的基因片段,插入到质粒pMD18-T中,经酶切和测序证实为uMtCK的基因编码序列,再插入到质粒pQE30,转化大肠埃希菌,诱导重组质粒pQE30-uMtCK表达酶融合蛋白.经亲和层析纯化,并进行SDS-PAGE、western blot鉴定及酶活性测定.纯化的uMtCK蛋白免疫家兔制备抗uMtCK多抗.结果
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