【摘 要】
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目的 建立一种硫辛酸合成酶基因低表达的基因修饰小鼠,并检测其抗氧化能力.方法 将硫辛酸合成酶基因3??-UTR区域Loxp小鼠与E2a-Cre小鼠杂交,从子代小鼠中鉴定出LiasL/+小鼠并进一步繁殖、鉴定基因型.选取基因型为LiasL/L和Lias+/+的8周龄雄性小鼠各10只;称重、麻醉后经股动脉采血,然后分离小鼠肺、肾及肝,并称重.应用Western Blot、免疫组化方法检测肺、肾、肝组织中硫辛酸合成酶(LIAS)蛋白的表达水平;分离血清,检测总抗氧化能力(TAC);对肾、肝、肺匀浆后提取总蛋白,
【机 构】
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新乡医学院公共卫生学院,河南 新乡 453003
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目的 建立一种硫辛酸合成酶基因低表达的基因修饰小鼠,并检测其抗氧化能力.方法 将硫辛酸合成酶基因3??-UTR区域Loxp小鼠与E2a-Cre小鼠杂交,从子代小鼠中鉴定出LiasL/+小鼠并进一步繁殖、鉴定基因型.选取基因型为LiasL/L和Lias+/+的8周龄雄性小鼠各10只;称重、麻醉后经股动脉采血,然后分离小鼠肺、肾及肝,并称重.应用Western Blot、免疫组化方法检测肺、肾、肝组织中硫辛酸合成酶(LIAS)蛋白的表达水平;分离血清,检测总抗氧化能力(TAC);对肾、肝、肺匀浆后提取总蛋白,检测其SOD、CAT酶活性及MDA含量.结果 Western Blot及免疫组化分析显示,除小鼠肝LIAS免疫组化分析结果外,LiasL/L组小鼠较Lias+/+组小鼠肾、肝及肺组织中LIAS蛋白表达水平均显著降低(P<0.05).与Lias+/+组小鼠相比,LiasL/L组小鼠血清TAC水平显著降低(P<0.05),LiasL/L小鼠肾、肝、肺脏器中SOD、CAT酶活性显著降低,MDA水平显著升高(P<0.05).结论 本研究鉴定了硫辛酸合成酶基因低表达的基因修饰小鼠,其在肾、肝及肺中表达较野生型小鼠均降低,并导致相应脏器的氧化损伤.
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