【摘 要】
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为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(1BRV) gD蛋白抗原表位,本研究利用pET-30a原核表达系统表达、纯化了重组gD蛋白,采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,取脾淋巴细胞与SP2/0细胞
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室
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为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(1BRV) gD蛋白抗原表位,本研究利用pET-30a原核表达系统表达、纯化了重组gD蛋白,采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,取脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,以重组gD蛋白作为包被抗原,通过间接ELISA筛选出一株稳定分泌抗gD蛋白的MAb杂交瘤细胞株(1G3).间接免疫荧光结果表明:MAb与IBRV呈阳性反应,中和试验测定其腹水中和效价为1:32.利用肽扫描技术原核表达GST融合短肽对MAb 1G3识别的抗原表位进行筛选鉴定,结果表明:该MAb识别的抗原表位为259EESKGYE265.蛋白序列分析表明该抗原表位在IBRV各分离株及牛疱疹病毒5型(BoHV-5)中均保守.本研究为IBRV的糖蛋白gD的结构和免疫学特性及IBRV致病性的深入研究奠定了基础.
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