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建立高效液相色谱-串联四极杆质谱正负离子切换模式同时快速测定黄鱼中黄色工业染料碱性嫩黄O及酸性橙Ⅱ的检测方法。样品匀质后，经乙腈提取，盐析，-20℃冷冻脱脂，低温离心后，取乙腈层采用高效液相色谱-串联质谱法分离、测定。结果表明碱性嫩黄O在0.5滋g/kg~10滋g/kg、酸性橙Ⅱ在5滋g/kg~100滋g/kg范围内呈良好的线性关系，高中低浓度回收率在70%~110%，相对标准偏差（n=5）小于15%，碱性嫩黄O、酸性橙Ⅱ检出限分别为0.5、5滋g/kg。本方法适用于黄鱼中违禁工业染料碱性嫩黄O及酸性橙Ⅱ