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目的
观察过表达Bmi1基因对人胚胎干细胞H1体外造血分化产生集落的影响。
方法人胚胎干细胞H1与小鼠骨髓间充质干细胞OP9共培养的方法体外模拟造血分化,在共培养第8天用磁珠分选筛选出CD34+造血前体细胞进行集落形成实验,诱导产生各系造血集落。用实时荧光定量PCR和Western印迹分别检测Bmi1基因和BMI1蛋白在人胚胎干细胞H1体外造血分化产生CD34+前体细胞过程中的表达变化。将过表达Bmi1基因的人胚胎干细胞H1用同样方法进行造血分化,比较其与正常的人胚胎干细胞H1体外造血分化产生集落的情况。
结果Bmi1基因在人胚胎干细胞H1体外造血分化产生CD34+前体细胞过程中的表达先升高后下降,过表达Bmi1基因的H1细胞相比正常H1细胞,集落形成实验产生红系集落和混合系集落的数目明显增加。
结论过表达Bmi1基因促进人胚胎干细胞H1体外造血分化过程中红系和混合系集落的产生。