【摘 要】
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目的:通过观察环状RNA（circRNA）BIRC6（circBIRC6）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达探讨其在肿瘤细胞免疫逃逸中的作用及分子机制。方法:体外培养人NSCLC细胞系（H1975、HCC827、H1650、H1299和A549）和人正常肺上皮细胞系（BEAS-2B）,qRT-PCR检测检测circBIRC6、miR-944和分化簇44（CD44）、程序性细胞死亡配体1（PD-L
【基金项目】
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湖北省卫生健康委科研项目，（编号：WJ2019M238）；
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目的:通过观察环状RNA（circRNA）BIRC6（circBIRC6）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达探讨其在肿瘤细胞免疫逃逸中的作用及分子机制。方法:体外培养人NSCLC细胞系（H1975、HCC827、H1650、H1299和A549）和人正常肺上皮细胞系（BEAS-2B）,qRT-PCR检测检测circBIRC6、miR-944和分化簇44（CD44）、程序性细胞死亡配体1（PD-L1）的表达。取A549细胞，分为正常对照（NC）组、si-NC组、si-circBIRC6组、si-circBIRC6+anti-NC组、si-circBIRC6+anti-miR-944组。转染48h后，采用qRT-PCR和Western blot检测细胞中circBIRC6、miR-944和CD44、PD-L1的mRNA和蛋白表达水平；MTT法检测细胞增殖活性，Transwell小室检测细胞迁移、侵袭能力；将A549细胞与CD8+T细胞共培养，台盼蓝染色测定共培养系统中CD8+T细胞活力，流式细胞术检测共培养系统中CD8+T细胞凋亡，ELISA法检测共培养细胞培养上清液中可溶性PD-L1（sPD-L1）、干扰素-γ（INF-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、颗粒酶B和穿孔素水平，验证敲低circBIRC6在NSCLC免疫逃逸中的作用。通过双荧光素酶报告（DLRA）、RNA免疫沉淀（RIP）和RNA pull-down实验验证A549细胞中circBIRC6、miR-944和CD44的调控机制。结果:circBIRC6和CD44、PD-L1在NSCLC中呈高表达，miR-944呈低表达。敲低circBIRC6（0.36±0.05比1.01±0.12）可上调miR-944（3.45±0.38比0.99±0.10）,抑制CD44 mRNA（0.39±0.05比1.00±0.10）、CD44蛋白（0.25±0.05比0.64±0.07）和PD-L1 mRNA（0.31±0.04比1.00±0.13）、PD-L1蛋白（0.17±0.03比0.52±0.06）表达，降低A549细胞增殖活力和迁移、侵袭能力（均P＜0.05）。在共培养系统中，敲低circBIRC6的A549细胞可激活CD8+T细胞[（68.35±7.20）%比（35.82±4.14）%],抑制CD8+T细胞凋亡[（23.85±3.76）%比（56.01±6.22）%],降低sPD-L1水平，增加IFN-γ、TNF-α、颗粒酶B和穿孔素水平（均P＜0.05）。下调miR-944可减弱circBIRC6敲低对A549细胞增殖、迁移和侵袭及CD8+T细胞活化的影响。DLRA、RIP和RNA pull-down实验证实circBIRC6可以靶向并结合A549细胞中的miR-944,且CD44是miR-944的靶标。结论:敲低A549细胞中的circBIRC6可通过下调PD-L1的表达和分泌，激活肿瘤微环境中的CD8+T细胞，进而抑制NSCLC的免疫逃逸；其分子机制可能与miR-944/CD44轴对PD-L1的调控作用有关。
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