【摘 要】
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目的建立西尼罗病毒快速、敏感和特异的实时RTPCR法,用于西尼罗病毒疾病的早期诊断。方法对Vero细胞增殖的西尼罗病毒分别进行常规RTPCR和实时RTPCR法扩增,以PFU/ml为参考标
【机 构】
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军事医学科学院微生物流行病研究所; 军事医学科学院微生物流行病研究所 100071北京病原微生物生物安全国家重点实验室; 100071北京病原微生物生物安全国家重点实验室;
【基金项目】
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“十五”国家科技攻关计划课题(编号2003BA712A)
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目的建立西尼罗病毒快速、敏感和特异的实时RTPCR法,用于西尼罗病毒疾病的早期诊断。方法对Vero细胞增殖的西尼罗病毒分别进行常规RTPCR和实时RTPCR法扩增,以PFU/ml为参考标准,比较二者的敏感性和特异性。并用实时RTPCR法检测西尼罗病毒感染的小鼠组织标本。结果采用所建立的实时RTPCR法和常规RTPCR法可分别检测到0.02PFU/ml和2PFU/ml的西尼罗病毒RNA,前者的敏感性比后者高100倍。而对其他黄病毒科成员的检测均为阴性,表明该方法是特异的。采用这种实时RTPCR法可从西尼罗病毒感染小鼠的血液、脾脏、肾脏和脑组织标本中检测出病毒核酸,且在感染后第2天最先自血液和脾脏中检测到病毒,在感染后1周的脑组织中的病毒滴度最高。结论本研究建立的实时RTPCR法具有很高的敏感性和特异性,因此该方法可用于西尼罗病毒疾病的早期监测和流行病学研究。
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