【摘 要】
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目的 基于特异性扩增建立动物药龟甲与鳖甲的真伪鉴定技术.方法 根据龟甲与鳖甲及3种常见伪品的全基因组序列的差异设计了5对特异性引物(PCR、PTS、PMS、PPS、PAF),采用SDS法
【机 构】
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镇江市食品药品监督检验中心,江苏镇江,212004江苏大学药学院,江苏镇江,212013;南京海昌中药集团有限公司,江苏南京,210061;
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目的 基于特异性扩增建立动物药龟甲与鳖甲的真伪鉴定技术.方法 根据龟甲与鳖甲及3种常见伪品的全基因组序列的差异设计了5对特异性引物(PCR、PTS、PMS、PPS、PAF),采用SDS法、酚仿抽提法从龟甲与鳖甲中提取与纯化DNA,并通过聚合酶链式反应(PCR)对目标片段进行扩增,产物以琼脂糖凝胶电泳分析及凝胶成像系统检测,并根据电泳条带的有无及分子量大小以鉴定真伪.结果 龟甲与鳖甲及其常见伪品巴西龟、花龟、佛罗里达鳖的DNA经扩增后分别在120、120、81、105、114 bp处产生条带,且引物间无交叉反应,体现出很强的专属性,5个物种DNA的检出限为1 ng.自制药材、饮片、掺伪品均扩增出与目的片段相一致的条带.在市售样品中,18批龟甲和20批鳖甲经鉴定为正品,2批龟甲药材经鉴定为来源于巴西龟的伪品.结论 本文所建立的技术可准确、快速地鉴定龟甲与鳖甲的真伪,有助于监控其产品质量.
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