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利用反向PCR法精确定位人结肠癌SW480细胞CD133基因启动子区对脱氧核糖核酸酶Ⅰ (DNaseⅠ)酶切敏感的位点。
方法提取SW480细胞的细胞核，以10 U/ml DNaseⅠ处理细胞核10 min。反向PCR扩增：提取基因组，用限制性内切酶EcoRⅠ和XmalⅠ片段化基因组，末端补平，T4连接酶连接，利用反向PCR后对产物测序，靠近限制性内切酶位点的序列即DNaseⅠ的切割位点。
结果CD133基因转录起始点上游9个DNaseⅠ高敏感位被鉴别出，它们位于第一个外显子-700～-300 bp碱基区域内。
结论用反向成环PCR技术可以精确测定DNaseⅠ的剪切位点，这些位点聚集在一个特定的区域内。