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目的
观察微小RNA(miRNA，miR)-135a通过Notch通路调控小儿肝母细胞瘤细胞增殖和增殖的影响。
方法将传代的肝母细胞瘤细胞分为两组：A组：PEF miR-135a和PSV2neo共转染组，B组：PEE和PSV2neo共转染组，取正常小儿肝脏细胞作为C组。A组为实验组，B、C两组为阳性对照组和阴性对照组。采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-135a在两组肝母细胞瘤细胞中的表达，采用流式细胞法检测过表达的miR-135a对肝母细胞瘤细胞凋亡的影响，利用噻唑蓝(MTT)法及碱性磷酸酶(ALP)法检测观察两组细胞的增殖和增殖，Western blot检测两组细胞中Jagged1和Notch1蛋白的表达水平。
结果Real-time PCR显示miR-135a在肝母细胞瘤细胞中的表达较正常小儿肝脏细胞明显下调(P＝0.009)；成功构建PEF-miR-135a真核表达载体，Real-time PCR显示：A组细胞miR-135a的表达明显上调(P＝0.003)。膜联蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)检测显示miR-135a过表达能够显著抑制肝母细胞瘤细胞的凋亡率(P＝0.030)。Western blot检测显示miR-135a过表达可以显著下调Jagged1和Notch1蛋白的表达水平。
结论miR-135a过表达可能通过下调Notch通路的表达来抑制小儿肝母细胞瘤细胞的增殖。