【摘 要】
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单核细胞增生李斯特菌(Lm)是主要的食源性致病菌之一,也是一种重要的人畜共患病原菌,感染人和动物后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多症等.为建立快速检测Lm的方法,本研究以Lm毒力因子actA作为特异性检测的靶基因,通过条件优化初步建立了快速检测食源性Lm的环介导等温扩增(LAMP)方法.并采用该方法进行了特异性、敏感性及临床样品检测试验.结果显示,利用建立的LAMP方法检测Lm、肠出血性大肠杆菌O157∶H7、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、小肠结肠炎耶尔森菌、产气荚膜梭菌、空肠弯曲菌、胸膜肺炎放线
【机 构】
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安徽农业大学动物科技学院,安徽 合肥 230036;中国农业科学院上海兽医研究所,上海 200241;安徽农业大学动物科技学院,安徽 合肥 230036;中国农业科学院上海兽医研究所,上海 20024
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单核细胞增生李斯特菌(Lm)是主要的食源性致病菌之一,也是一种重要的人畜共患病原菌,感染人和动物后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多症等.为建立快速检测Lm的方法,本研究以Lm毒力因子actA作为特异性检测的靶基因,通过条件优化初步建立了快速检测食源性Lm的环介导等温扩增(LAMP)方法.并采用该方法进行了特异性、敏感性及临床样品检测试验.结果显示,利用建立的LAMP方法检测Lm、肠出血性大肠杆菌O157∶H7、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、小肠结肠炎耶尔森菌、产气荚膜梭菌、空肠弯曲菌、胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌、猪链球菌、猪丹毒丝菌或支气管败血波氏杆菌基因组DNA,除 Lm为阳性外,其他病原菌均为阴性,表明该方法的特异性较强;将Lm菌液10倍倍比稀释为4.7×109cfu/mL～4.7×100cfu/mL,再采用该LAMP方法和常规PCR方法进行检测,结果显示,LAMP对Lm的检测下限为4.7×101cfu/mL,而常规PCR对Lm的检测下限为4.7×103cfu/mL,即LAMP比普通PCR的敏感性高100倍,表明本研究建立的LAMP方法敏感性较高;采用建立的LAMP方法对118份猪肉临床样品进行检测,结果显示有3份样品为阳性,与常规PCR和国标的检测结果均一致.本研究基于Lm actA基因建立了Lm LAMP检测方法,且该方法具有特异性强、敏感性高、结果可视等优点,适用于实验室和基层食品安全监管部门的现场快速检测.
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