【摘 要】
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以健康昆诺阿藜叶片和受ASGV侵染的昆诺阿藜叶片为试材,利用Trizol试剂提取植物总RNA,将实时荧光RT-PCR体系的主要成分设定梯度,根据每个成分的变化引起的(Rn值和Ct值的差异,
【机 构】
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福建出入境检验检疫局,北仑出入境检验检疫局,石河子大学农学院,中国检验检疫科学研究院动植物检疫研究所
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以健康昆诺阿藜叶片和受ASGV侵染的昆诺阿藜叶片为试材,利用Trizol试剂提取植物总RNA,将实时荧光RT-PCR体系的主要成分设定梯度,根据每个成分的变化引起的(Rn值和Ct值的差异,探讨苹果茎沟病毒实时荧光RT-PCR技术中反应体系的主要成分对扩增结果的影响。最终确定了RT-PCR反应体系的最佳条件为:25μL体系中,Mg^2+浓度为3.5 mM,引物浓度为0.6μM,探针浓度为0.6μM,总RNA含量为20 ng。利用此反应体系进行扩增,△Rn值比未优化时高出一个数量级,表明该体系适合ASGV实时
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